Estudo da variabilidade genética do antígeno de superfície GP82 de tripomastigotas metacíclicos de Trypanosoma cruzi: identificação do repertório de transcritos e do sítio de ligação à célula de mamífero

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Data
2012
Autores
Correa, Paulo Roberto Ceridorio [UNIFESP]
Orientadores
Silveira Filho, José Franco da [UNIEFSP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Para aumentar a probabilidade de invadir e adaptar-se ao hospedeiro, Trypanosoma cruzi desenvolveu um vasto repertorio de moleculas de superficie. Os tripomastigotas metaciclicos, formas encontradas no inseto vetor, expressam uma glicoproteina de superficie (GP82) estagio-especifica que esta envolvida na penetracao do parasita na celula de mamifero. A GP82 e uma adesina que induz mobilizacao do calcio intracelular na celula alvo e no parasita. A familia genica GP82 pertence a superfamilia das trans-sialidases (TS). No presente trabalho nos investigamos a divergencia e polimorfismo no repertorio de genes GP82 da cepa G e do clone CL Brener. A diversidade da proteina GP82 entre os isolados foi investigada por sequenciamento de clones genomicos e de cDNA e analise funcional de cDNAs pela inibicao da invasao de celulas de mamiferos por formas metaciclicas com proteinas GP82 recombinantes e reatividade com um anticorpo monoclonal (Mab 3F6) especifico para a GP82. Nos fizemos analises filogeneticas baseadas em alinhamento multiplo da sequencias GP82 com elevada similaridade com GP82 de referencia identificadas no GenBank por BlastP e BlastN. Nos identificamos 19 sequencias GP82 paralogas completas no clone CL Brener, um numero relativamente pequeno quando comparado com outros genes do grupo II da superfamilia TS (GP90, Tc85/GP85, ASP). Existem variacoes intra-cepa entre as sequencias GP82 indicando a existencia de varias copias por cepa. A variabilidade da GP82 entre cepas concorda com a subdivisao genetica de T. cruzi em linhagens. As proteinas GP82 apresentam homologia significativa entre as regioes carboxiterminal e dominio central com acentuada conservacao da distribuicao de cisteinas. A analise filogenetica baseada em sequencias completas e no alinhamento das regiao C-terminal e o alinhamento do dominio central da GP82 revelaram que sequencias GP82 derivadas de um dado isolado se agrupam entre si, sugerindo que os genes GP82 poderiam estar estruturados de maneira especie-especifica. Nos tambem investigamos a capacidade adaptativa da familia GP82 comparando a frequencia de substituicoes nucleotidicas nao sinonimas (alteracao de aminoacido) e sinonimas (conservacao de aminoacido). A comparacao da frequencia de substituicoes sinonimas (dS) e nao sinonimas (dN) nos genes GP82 indicou a ocorrencia de pressao seletiva. O dominio central da GP82 que contem os sitios de ligacao a celula hospedeira e a mucina gastrica esta sujeito a selecao negativa portanto ele estaria sob evolucao purificadora. Este resultado esta de acordo com um trabalho previo do nosso laboratorio que mostrou que a familia GP82 tem perfil robusto ou menos vulneravel a mutacoes ao nivel da proteina. Assim, um gene mais robusto (menos volatil) tende a codificar o mesmo aminoacido (ou aminoacido similar) quando afetado por mutacao. A analise filogenetica forneceu evidencia da ocorrencia de recombinacao genetica entre os genes GP82 dos haplotipos Esmeraldo e nao-Esmeraldo do clone CL Brener. A recombinacao foi detectada em doze loci genicos GP82 na forma de genotipos em mosaico derivados dos haplotipos Esmeraldo e nao-Esmeraldo. Nos desenvolvemos um sistema de expressao em Escherichia coli que pode ser usado para gerar pequenos peptideos recombinantes da GP82 que contem o epitopo do Mab 3F6 e os sitios de ligacao a celula de mamifero e a mucina gastrica. Este sistema sera util, reduzindo o tempo e esforco necessarios, para confirmar se os genes anotados como GP82 no genoma sao funcionalmente ativos
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2012. 183 p.