Caracterização de ciminases purificadas a partir de urina humana utilizando substratos com apagamento intramolecular de fluorescência
| dc.contributor.advisor | Casarini, Dulce Elena [UNIFESP] | |
| dc.contributor.author | Quinto, Beata Marie Redublo [UNIFESP] | |
| dc.date.accessioned | 2015-12-06T23:00:53Z | |
| dc.date.available | 2015-12-06T23:00:53Z | |
| dc.date.issued | 2000 | |
| dc.description.abstract | Cininase e uma denominacao geral para enzimas proteoliticas capazes de inativar cininas como bradicinina (BK), lisil-bradicinina (LBK) e metionil-lisil-bradicinina (MLBK). Em estudos anteriores realizados em nosso laboratorio, foram purificadas de urina de individuos normais, atraves de cromatografia em DEAE-celulose, 8 enzimas com atividade cininasica: duas atividades do tipo carboxipeptidase, duas enzimas conversaras de angiotensina I, duas serino endopeptidase (Hl e H2), uma prolil endopeptidase (H) e uma endopeptidase neutra (NEP-Iike). Neste trabalho, com o objetivo de estabelecer um metodo extremamente sensivel para a quantificacao de endopeptidases, purificamos e caracterizamos 4 enzimas, a partir de urina humana, que foram classificadas com base nos estudos de inibicao e ligacao hidrolisada na molecula de BK, como serino tiol endopeptidase (H2), serino endopeptidase (Hl), prolil endopeptidase (H) e endopeptidase neutra (NEP-Iike). Para tanto utilizamos o substrato com apagamento intramolecular da fluorescencia AbzOBKQOEDDnp, bem como testamos diversos substratos fluorogenicos para estudar a especificidade das referidas enzimas. A prolil endopeptidase e uma tiol metalo endopeptidase sendo inibida por EDTA, 2-ME e POHMB. A serino endopeptidase Hl foi inibida por PMSF e a serino tio[ endopeptidase H2 alem de ser inibida por PMSF foi tambem inibida por E64 e POHMB. A NEP-Iike foi inibida por fosforamidom, tiorfam e OPA. Os substratos fluorogenicos Abz-FPQ-EDDnp, Abz-FGQ-EDDnp, AbzFRQ-EDDnp e Abz-FDQ-EDDnp foram determinados especificos para as enzimas H, Hl, H2 e NEP-Iike respectivamente. O Km encontrado foi da ordem de mM para estes substratos, bem como para Abz-BKQ-EDDnp. Utilizando o substrato Abz-BKQ-EDDnp a atividade maxima encontrada para a prolil endopeptidase foi em 9,0; para a serino endopeptidase Hl foi em 7,0 e 8,5, e para a NEP-Iike foi em 7,0 e 8,0. Quando utilizamos os substratos especificos para cada enzima encontramos atividade maxima nos seguintes pHs: 6,5 e 8,0 para a prolil endopeptidase, utilizando o substrato Abz-FPQ-EDDnp; 5,5 e 8,0 para a serino Hl utilizando o substrato Abz-FRQ-EDDnp; e 6,0 e 7,0 para a NEP-/ike utilizando o substrato Abz-FDQ-EDDnp. Para a endopeptidase H2 nao foi possivel determinar o pH otimo de atividade. Os pesos moleculares determinados para a prolil endopeptidase, 45 kDa; para a serino endopeptidase Hl, 49 kDa...(au) | pt |
| dc.description.source | BV UNIFESP: Teses e dissertações | |
| dc.format.extent | 103 p. | |
| dc.identifier.citation | São Paulo: [s.n.], 2000. 103 p. ilustabgraf. | |
| dc.identifier.file | epm-016446.pdf | |
| dc.identifier.uri | http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/16711 | |
| dc.language.iso | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/restrictedAccess | |
| dc.subject | Endopeptidases | pt |
| dc.subject | Calicreínas | pt |
| dc.subject | Urina | pt |
| dc.subject | Compostos cromogênicos | pt |
| dc.subject | Substratos | pt |
| dc.title | Caracterização de ciminases purificadas a partir de urina humana utilizando substratos com apagamento intramolecular de fluorescência | pt |
| dc.title.alternative | Study of kininases, purified from human urine and from fresh urine using internally quenched fluorescents substrates | en |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/masterThesis | |
| unifesp.campus | São Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM) | pt |
| unifesp.graduateProgram | Medicina (Nefrologia) |