Expressão gênica de marcadores da imunidade em queratinócitos cultivados de pacientes com grande queimadura
Data
2016-10-31
Autores
Corrêa, Silvana Aparecida Alves 
Orientadores
Gragnani Filho, Alfredo
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
INTRODUCTION: Burns affect about one percent of the world population. More than one million burns occur in the United States each year and about 5,000 are fatal, causing the burn is the fourth leading cause of death from unintentional injuries in this country. Victims of burns have high susceptibility to infections, being directly related to morbidity and mortality rates. PURPOSE: To evaluate genic expression of immunity markers in cultivated keratinocytes of patients with large burn. METHODS: After obtaining viable fragments of skin with and without burning, culture of keratinocytes was initiated by the enzymatic method using Dispase. These cells were treated with Trizol® for extraction of total RNA. This was quantified and analyzed for purity for obtaining cDNA for the analysis of gene expression using PCR Arrays plates for immunity. RESULTS: After the analysis of gene expression we found, in keratinocytes culture, seven (07) differentially expressed genes (8%) that presented 100% hipo-expressed. And, in skin fragments, 63% genes were differentially expressed, of which 77% were repressed and 23% were hyper-regulated. CONCLUSION: In the acute phase in large burn were observed HLA-E, IL1R1, and IL-6 been priority genes in the keratinocyte culture; and in the skin fragments the priority genes were IL-8, IL-6, TNF- alfa, HLA-E, LYZ, and CCR6.
Introdução: As queimaduras atingem cerca de um por cento da população mundial. Mais de um milhão de queimaduras ocorrem nos Estados Unidos por ano e cerca de 5000 são fatais, fazendo com que a queimadura seja a quarta principal causa de morte por lesões não intencionais neste país. Os pacientes vitimados por queimaduras possuem alta susceptibilidade a infecções, estando diretamente relacionada às taxas de morbidade e mortalidade. Objetivo: Avaliar a expressão gênica de marcadores da imunidade em queratinócitos cultivados de pacientes com grande queimadura. Métodos: Após a obtenção de fragmentos viáveis de pele ao redor da queimadura, tendo como controle pele de paciente sem queimadura, a cultura de queratinócitos foi iniciada pelo método enzimático, usando Dispase. As amostras foram tratadas com Trizol® para a extração de RNA total. Esse foi quantificado e analisado quanto à pureza para obtenção do DNA complementar para a análise da expressão do gene, utilizando placas de PCR Arrays específicos para imunidade. Resultados: Após a análise da expressão do gene verificou-se, em cultura de queratinócitos, sete (07) genes diferencialmente expressos (8%) que se apresentaram 100% hipo-expressos. Nos fragmentos de pele 63% genes diferencialmente expressos, dos quais 77% foram hipo expressos e 23% foram hiper expressos. Conclusão: Na fase aguda da grande queimadura foram observados HLA-E, IL1R1 e IL-6 como genes prioritários na cultura de queratinócitos; enquanto no fragmento da pele os genes prioritários foram IL-8, IL-6, TNF-alfa, HLA-E, LYZ, CCR6.
Introdução: As queimaduras atingem cerca de um por cento da população mundial. Mais de um milhão de queimaduras ocorrem nos Estados Unidos por ano e cerca de 5000 são fatais, fazendo com que a queimadura seja a quarta principal causa de morte por lesões não intencionais neste país. Os pacientes vitimados por queimaduras possuem alta susceptibilidade a infecções, estando diretamente relacionada às taxas de morbidade e mortalidade. Objetivo: Avaliar a expressão gênica de marcadores da imunidade em queratinócitos cultivados de pacientes com grande queimadura. Métodos: Após a obtenção de fragmentos viáveis de pele ao redor da queimadura, tendo como controle pele de paciente sem queimadura, a cultura de queratinócitos foi iniciada pelo método enzimático, usando Dispase. As amostras foram tratadas com Trizol® para a extração de RNA total. Esse foi quantificado e analisado quanto à pureza para obtenção do DNA complementar para a análise da expressão do gene, utilizando placas de PCR Arrays específicos para imunidade. Resultados: Após a análise da expressão do gene verificou-se, em cultura de queratinócitos, sete (07) genes diferencialmente expressos (8%) que se apresentaram 100% hipo-expressos. Nos fragmentos de pele 63% genes diferencialmente expressos, dos quais 77% foram hipo expressos e 23% foram hiper expressos. Conclusão: Na fase aguda da grande queimadura foram observados HLA-E, IL1R1 e IL-6 como genes prioritários na cultura de queratinócitos; enquanto no fragmento da pele os genes prioritários foram IL-8, IL-6, TNF-alfa, HLA-E, LYZ, CCR6.
Descrição
Citação
CORRÊA, Silvana Aparecida Alves. Expressão gênica de marcadores da imunidade em queratinócitos cultivados de pacientes com grande queimadura. 2016. 94 f. Tese (Doutorado em Cirurgia Translacional) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.