Pesquisa do vírus TT (Torque Teno Virus) em primatas não humanos e em frangos de corte(Gallus g. domesticus), pela técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR) e caracterização do genoma viral

Data
2008
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
O Torque Teno Vírus (TTV) foi primeiramente identificado em 1997, no Japão, em urn paciente com hepatite aguda pós-transfusão, de etiologia desconhecida, sendo após, caracterizado como urn pequeno vírus DNA circular de fita simples e não envelopado. Recentemente, o Torque Teno Vírus foi classificado em urn novo gênero chamado Anellovírus, que compreende também, o Torque Teno Mini Vírus (TTMV), Torque Teno Midi Vírus (TTMDV) e pequenos anelovírus (SAV). 0 TTV tern sido detectado em uma ampla gama de primatas nao humanos, bem como em animais domésticos. Este trabalho teve por objetivo pesquisar o TTV no soro e sangue total de primatas nao humanos e em plasma de frangos domésticos de corte (Gallus g. domesticus), pela aplicação da Nested-PCR da região não codificadora (UTR) e pel a Semi­Nested-PCR da região codificadora N22, seguido de seqüenciamento genômico e de análise filogenética. Através da Nested-PCR da região não codificadora (UTR) o DNA do TTV foi detectado no soro de 4 (5,3%) de 75 Cebus apella, 2 (40%) de 5 Alouata fusca, 1 (20%) de 5 Alouata caraya, 1 (5.2%) de 19 Callithrix penicilata, 1 (4%) de 25 Callithrix jacchus, 1 (20%) de 5 Saimiri sciureus e 1 (25%) de 4 Leontopithecus chrysomelas. Nao se obteve amplificação por PCR-UTR em nenhuma amostra de sangue total. A análise filogenética revelou que as seqüências detectadas em 8 amostras apresentaram maior identidade com as seqüências de TTV isoladas de macacos japoneses do novo mundo: So-TTV2 (Saüíinus oedipus) e At-TTV3 (Aotes Trivirgatus). Trt!!s seqüências (uma de Callithrix penicilata, uma de Leontopithecus crysomelas e uma de Cebus apella) mostraram similaridade com uma seqüência de Torque Teno Mini Vírus (TTMV) de humanos. Não se obteve amplificação por PCR-UTR em nenhuma amostra de plasma de frangos domésticos de corte (Gallus g. domesticus). Três amostras foram positivas pela amplificação da região ORF2. 0 DNA do TTV da região ORF2 foi detectado em uma amostra de soro de Cebus apella e em uma amostra de sangue total de Callithrix jacchus, e em uma de plasma de frango doméstico de corte (Gallus g. domesticus). As seqüências amplificadas pela região ORF2 nao mostraram diferenças entre as de humano, primatas nao humanos e de frango doméstico Pela Semi-Nested-PCR da região codificadora (N22), o DNA do TTV foi detectado no sangue total de 3 (4%) de 75 Cebus apella e de 1 (25%) de 4 Leontopithecus chrysomelas. Não se obteve amplificação por PCR em nenhuma amostra de soro. A análise filogenética revelou que uma amostra de Cebus apella agrupou-se com seqüências de macacos japoneses do novo mundo: Saguinus oedipus (So-TTV2) e Aotes trivirgatus (At-TTV3); duas amostras de Cebus apella mostraram similaridade com uma seqüência de Torque Teno Mini Vírus (TTMV) de humanos e uma (Cebus apella) mostrando similaridade com uma seqüência de chimpanzé (Pt-TTV6) e com uma seqüência de TTV de humano, cepa protótipo denominada TA278. Não se obteve amplificação por PCR-N22 em nenhuma amostra de plasma de frangos domésticos de corte (Gallus g. domesticus). Os resultados apresentados mostraram que este é o primeiro relato da ocorrência de Torque Teno Vírus e Torque Teno Mini Vírus em primatas não humanos do novo mundo e em frangos de corte (Gallus g. domesticus) no Brasil.
Torque Teno Virus (TTV) was first identified in the serum of a patient with acute post-transfusion hepatitis of unknown etiology in 1997 and was characterized as a small nonenveloped virus with a circular, single-stranded DNA. Recently, Torque Teno Virus has been classified to the newly genus called Anellovirus, which also comprises Torque Teno Mini Virus (TTMV), Torque Teno Midi Virus (TTMDV) and small Anellovirus. TTV has been detected in a range of non-human primates as well as domestic animals. The purpose of this study was to search TTV in the serum and total blood of nonhuman primates and in plasma of domestic chickens of cut (Gallus g. domesticus) by application the nested-PCR of the non-coding region (UTR) and by semi-nested-PCR of the coding region (N22), followed by a genomic sequence and phylogenetic analysis. By nested-PCR of non-coding region (UTR), the TTV DNA was detected in sera from 4 (5.3%) of 75 Cebus apella, 2 (40%) of 5 Alouata fusca, 1 (20%) of 5 Alouata caraya, 1 (5.2%) of 19 Callithrix penicilata, 1 (4%) of 25 Callithrix jacchus, 1 (20%) of 5 Saimiri sciureus e 1 (25%) of 4 Leontopithecus chrysomelas. No PCR-UTR amplification in any total blood sample was obtained. Phylogenetic analysis revealed that sequences detected in 8 samples had presented greater identity with TTV sequences isolated of Japanese new world non-human primates (So-TTV2 - Sagüínus oedipus and At-TTV3 - Aotes Trivirgatus). Three sequences (1 of Callithrix penicilata, 1 of Leontopithecus crysomelas and 1 of Cebus apella) showed similarity with a human Torque Teno Mini Virus (TTMV) sequence. No PCRUTR amplification in any domestic chicken plasma sample was obtained. Three additional samples were positive by the amplification of the ORF-2 region. TTV ORF2 DNA was detected in one sera sample of Cebus apella and one whole blood sample of Callithrix jacchus and in one plasma sample of domestic chicken of cut (Gallus g. domesticus). The sequences amplified by the ORF2 region showed no differences between human, non-human primates and domestic chicken. By semi-nested-PCR of coding region (N22), the TTV DNA was detected in total blood from 3 (4%) out of 75 Cebus apella and from 1 (25%) out of 4 Leontopithecus chrysomelas. No PCR amplification in any serum sample was obtained. Phylogenetic analysis revealed that one sample of Cebus apella clustered with sequences isolated of Japanese new world non-human primates (Saguinus oedipus - So-TTV2 and Aotes trivirgatus - At-TTV3); two samples of Cebus apella showed similarity with a human Torque Teno Mini Virus (TLMV) sequence. The other sample of Cebus apella showed similarity with one sequence of the chimpanzee (Pt-TTV6) and with the human TTV strain called TA278. No PCR amplification any domestic chicken plasma sample was obtained. The presented results showed that this is the first occurrence of Torque Teno Virus and Torque Teno Mini Virus in new world non-human primates and domestic chicken of cut (Gallus g. domesticus) in Brazil.
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Citação
CATROXO, Márcia Helena Braga. Pesquisa do vírus TT (Torque Teno Virus) em primatas não humanos e em frangos de corte(Gallus g. domesticus), pela técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR) e caracterização do genoma viral. 2008. 86 f. Tese (Doutorado em Ciências) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, 2008.
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