Estudo da especificidade peptídica da calicreína humana 13
Data
2014-06-25
Autores
Andrade, Douglas de 
Orientadores
Juliano, Maria Aparecida Juliano
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
KLK13 is a kallikrein-related peptidase preferentially expressed in tonsils, esophagus, testis, salivary glands and cervix. We report the activation of KLK13 by kosmotropic salts and glycosaminoglycans and its substrate specificity by employing a series of five substrates derived from the fluorescence resonance energy transfer (FRET) peptide Abz-KLRSSKQ-EDDnp. KLK13 hydrolyzed ali these peptides only at basic residues with highest efficiency for R; furthermore, the S3 to S2 subsites accepted most of· the natural amino acids with preference also for basic residues. Using a support-bound FRET peptide library eight peptide substrates were identified containing sequences of proteins found in testis and one with myelin basic protein sequence, each of which was well hydrolyzed by KLK13. Histatins are salivary peptides present in higher primates with broad antifungal and mucosal healing activities that are generated from the hydrolysis from large precursor peptides. KLK13 efficiently hydrolyzed synthetic histatin 3 exciu- sively at R25 (DSHAKRHHGYKRKFHEKHHSHRGYR25YSNYL YDN) that is the first cieavage observed inside the salivary gland. In conclusion, the observed hydrolytic activities of KLK13 and its co-Iocalization with its activators, glycosaminoglycans in the salivary gland and high concentration of sodium citrate in male reproductive tissues, indicates that KLK13 may play a role in the defense of the upper digestive apparatus and in male reproductive organs. ix
A Calicreína 13 Humana (KLK 13) é uma peptidase expressa preferencialmente em órgãos glandulares como tonsilas, esôfago, testículos, glândulas salivares e colo do útero (cérvix). Sais e glicosaminoglicanos aumentaram a atividade proteolítica da KLK 13 na hidrólise de substratos peptídicos sintéticos fluorescentes (FRET-Fluorescense Resonance Energy Transfer) provindos da sequência molde Abz-KLRSSKQ-EDDnp. A KLK13 hidrolisou apenas substratos tendo R na posição PI, apresentando melhores kcat/Km quando resíduos de aminoácidos básicos localizavam-se nas demais posições. Utilizando-se uma biblioteca de peptídeos em fase sólida identificou-se possíveis substratos naturais para essa peptidase. Dentre os candidatos a substratos naturais pode-se citar várias proteínas encontradas em testículos, a proteína básica de mielina (MBP-Myelin Basic Protein) e peptídeos com poder fungicida encontrados na saliva humana, as histatinas. Os resultados indicam que a KLK13, co-localizada fisiologicamente com sais e/ou glicosaminoglicanos, pode ter importante papel biológico tanto na defesa do aparato digestivo quanto no órgão reprodutivo humano.
A Calicreína 13 Humana (KLK 13) é uma peptidase expressa preferencialmente em órgãos glandulares como tonsilas, esôfago, testículos, glândulas salivares e colo do útero (cérvix). Sais e glicosaminoglicanos aumentaram a atividade proteolítica da KLK 13 na hidrólise de substratos peptídicos sintéticos fluorescentes (FRET-Fluorescense Resonance Energy Transfer) provindos da sequência molde Abz-KLRSSKQ-EDDnp. A KLK13 hidrolisou apenas substratos tendo R na posição PI, apresentando melhores kcat/Km quando resíduos de aminoácidos básicos localizavam-se nas demais posições. Utilizando-se uma biblioteca de peptídeos em fase sólida identificou-se possíveis substratos naturais para essa peptidase. Dentre os candidatos a substratos naturais pode-se citar várias proteínas encontradas em testículos, a proteína básica de mielina (MBP-Myelin Basic Protein) e peptídeos com poder fungicida encontrados na saliva humana, as histatinas. Os resultados indicam que a KLK13, co-localizada fisiologicamente com sais e/ou glicosaminoglicanos, pode ter importante papel biológico tanto na defesa do aparato digestivo quanto no órgão reprodutivo humano.
Descrição
Citação
ANDRADE, Douglas de. Estudo da especificidade peptídica da calicreína humana 13. 2014. 74 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2014.