Papel da angiotensina ii na expressão gênica do receptor de (pro) renina em células mesangiais em cultura
Data
2015-07-31
Autores
Pereira, Luciana Guilhermino 
Orientadores
Boim, Mirian Aparecida Boim
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
O receptor de renina/prorenina (RRP) constitui um novo componente ativo do Sistema Renina-Angiotensina (SRA) contribuindo para aumentar a síntese local de AII e ativar a via pró-fibrótica mediada pelas quinases ERKs1/2. Em trabalho anterior mostramos que o losartan reduziu a expressão do RRP em células mesangiais (CMs) estimuladas com glicose indicando uma possível relação entre a AII e a expressão do RRP. Para avaliar se este efeito supressor da AII foi devido a sua ação intracelular, comparamos o efeito de diferentes bloqueadores dos receptores AT1 (BRA), o Losartan e o Candesartan, uma vez que apenas o losartan pode ser internalizado em associação ao AT1, enquanto que o candesartan permanece preso ao receptor na superfície celular. Avaliamos o efeito desses bloqueadores sobre a expressão do RRP, dos componentes do SRA e fosforilação de ERK. CMs em cultura foram incubadas por 24 horas, de acordo com os grupos: Controle (CTL-10mM glicose); alta glicose (GL-30mM); alta glicose na presença de 100nM de Losartan (GL+Los) ou 1µM de Candesartan (GL+Cand). As expressões de RNAm para RRP, fibronectina e ?-actina foram determinadas através de PCR em tempo real. Expressão de ERK, p-ERK e prorenina foi estimada por Western blot. Níveis de AII no meio de cultura e no lisado celular foram quantificados por HPLC. A estabilidade do RNAm do RRP foi avaliada por PCR em tempo real após a inibição da transcrição pela actinomicina D. A atividade de dois sítios de ligação na região promotora do gene codificador de RRP com fatores de transcrição estimulados pela AII, o NF-?B e o AP-1, foi avaliada através de inibidores específicos (quinazolina e curcumina respectivamente). O bloqueio da síntese de AII pela célula mesangial foi feito com o silenciamento do gene do Angiotensinogênio com RNA de interferência. A glicose aumentou o conteúdo de AII intracelular, a expressão de RRP, p-ERK/ERK, prorenina e fibronectina. Losartan foi capaz de reverter completamente esses efeitos enquanto que o Candesartan reverteu o aumento da AII, do RRP e da fibronectina mas não reverteu o aumento da prorenina e, consequentemente, da ativação da via da ERK. A estabilidade do RNAm de RRP não foi alterada com o tratamento com glicose. A inibição do NF-?B, mas não do AP-1, reduziu a expressão do RRP. O bloqueio do angiotensinogênio pelo RNA de interferência causou aumento do RRP e da ativação da via do NF-?B. Esses resultados sugerem que: 1) Os BRA capazes de inibir a ação intracelular da AII (Los) podem ser potencialmente mais efetivos para reduzir a atividade do SRA por um mecanismo envolvendo a supressão do gene do RRP; 2) A AII intracelular parece ter uma participação direta na regulação do gene do RRP mas sua ausência provavelmente dispara outros mecanismos compensatórios para essa regulação.
Descrição
Citação
PEREIRA, Luciana Guilhermino. Papel da angiotensina ii na expressão gênica do receptor de (pro) renina em células mesangiais em cultura. 2015. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2015.