Aplicação de isoforma de lacase purificada de meio de cultura do fungo endofítico xylaria sp. para promoção de crosslinking in vitro em córneas de abatedouro

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dc.contributor.advisorSchor, Paulo [UNIFESP]
dc.contributor.advisor-coBersanetti, Patrícia Alessandra [UNIFESP]
dc.contributor.advisor-coLatteshttp://lattes.cnpq.br/2079980672037938pt_BR
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/3542867700396961pt_BR
dc.contributor.authorLins, Bruna Vitoria Oliveira [UNIFESP]
dc.contributor.authorScomparim, Giulia [UNIFESP]
dc.contributor.authorKim, Steffany Ji Hee [UNIFESP]
dc.coverage.spatialSão Paulopt_BR
dc.date.accessioned2023-02-01T18:12:54Z
dc.date.available2023-02-01T18:12:54Z
dc.date.issued2023-01-16
dc.description.abstractO ceratocone é uma doença corneana progressiva, bilateral e assimétrica, caracterizada por afinamento estromal e subsequente ectasia da córnea central e paracentral, com protrusão cônica, que provoca astigmatismos irregulares e miopia e proporciona baixa acuidade visual. As alterações visuais decorrentes desta ectasia podem ser controladas de diferentes formas, a depender da sua progressão. Neste contexto, o corneal crosslinking (CXL) permite estabilizar a progressão do ceratocone em córneas onde não há afinamento severo, utilizando a riboflavina como fotossensibilizador, seguida de exposição à luz ultravioleta A (UVA), para melhorar a estabilidade biomecânica e a resistência enzimática da córnea, retardando ou interrompendo a progressão da condição através da indução de ligações cruzadas no estroma. Entretanto, alguns estudos têm associado diversas complicações ao método convencional de CXL, tais como a perda e polimorfismos de queratócitos, perda de células endoteliais, com danos estruturais e funcionais persistentes, opacificações e perfurações de córnea, achatamento e ceratite secundária. Portanto, métodos alternativos para a obtenção de ligações cruzadas no estroma devem ser considerados, como por exemplo através de oxidorredutases, enzimas que catalisam reações de oxi-redução formando ligações cruzadas covalentes em proteínas, como o colágeno. Neste contexto, a enzima lacase surge como um composto natural com atividade potencial para a promoção de ligações cruzadas em córneas, apresentando, ao mesmo tempo, efeito citotóxico muito reduzido, e portanto, maior viabilidade de aplicação. Dessa forma, no presente estudo, obteve-se a enzima lacase por fermentação do fungo endofítico Xylaria sp., seguida de sua purificação e aplicação em crosslinking in vitro de córneas de porco de abatedouro. As córneas foram, então, caracterizadas por resistência à degradação enzimática e perfil de desnaturação térmica por calorimetria exploratória diferencial (DSC) para avaliar o potencial da lacase como um método alternativo ao CXL tradicional. Nossos resultados demonstram que o uso da enzima lacase em combinação com uma molécula fenólica, a catequina, possui grande potencial na formação de ligações cruzadas in vitro, reduzindo a taxa de degradação enzimática por colagenase e aumentando a temperatura de desnaturação em ensaios de DSC. Isoladamente, a lacase produzida pelo fungo endofítico Xylaria sp., quando comparada à comercial (Sigma-Aldrich), vii possui atividade de reticulação inferior. Entretanto, a combinação das lacases e catequina, apresentou níveis similares de atividade, sem diferenças estatisticamente significativas entre os grupos, demonstrando que a enzima produzida em nosso projeto é igualmente funcional à comercial, quando utilizadas concomitantemente à catequina, e que possui potencial considerável na promoção de ligações cruzadas no estroma, sendo uma alternativa interessante ao método de CXL.pt_BR
dc.emailadvisor.custompschor@pobox.compt_BR
dc.format.extent62 f.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/66783
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesspt_BR
dc.subjectCrosslinkingpt_BR
dc.subjectCeratoconept_BR
dc.subjectLacasept_BR
dc.subjectCórneapt_BR
dc.titleAplicação de isoforma de lacase purificada de meio de cultura do fungo endofítico xylaria sp. para promoção de crosslinking in vitro em córneas de abatedouropt_BR
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesispt_BR
unifesp.campusEscola Paulista de Medicina (EPM)pt_BR
unifesp.graduacaoTecnologia Oftálmicapt_BR
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