Estudo do comportamento intracelular de mycobacterium abscessus subspBolletii crm0019
Data
2014-05-31
Autores
Ribeiro, Giovanni Monteiro 
Orientadores
Leao, Sylvia Luisa Pincherle Cardoso Leao
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Mycobacterium abscessus is a rapidly growing mycobacterium (RGM), responsible for infections of skin, soft tissue and lung disease especially in patients with cystic fibrosis. Since 1998, several outbreaks of localized infection caused by members of the M. chelonae - M . abscessus group were recognized in patients undergoing invasive procedures in Brazil. The study of the intracellular behavior of M. abscessus in different host cells, with respect to species and cell type, can provide a more detailed insight into the physiological, compositional, and functional fusional state of phagosomes containing mycobacteria, helping to understand the biological status during bacterial infection. The aim of this study was to characterize the intracelular infection of M. abscessus subsp bolletii CRM0019, responsible for nosocomial infections in different states of Brazil between 2004 and 2008. We conducted comparative in vitro studies with the reference M. abscessus strain ATCC 19977 and diferente host cells such as A549 pneumocytes, RAW cells and bone marrow-derived macrophages (BMDM). We employed immunofluorescence, flow cytometry and determination of colony forming units. We observed that M. abscessus CRM0019 possesses a phagosome phenotype similar to that of pathogenic mycobacteria in A549 cells, surviving and multiplying once internalized. This characteristic of the strain was not reproduced in macrophages. With the reference strain ATCC19977 intracellular multiplication was not observed, only survival. CRM0019 and ATCC19977 obtained after a first infection in BMDM had higher survival after reinfection in BMDM and A549. The use of flow cytometry was ineffective for assessing the intracellular growth of M. abscessus in A549 cells, but showed a possible replication inside RAW cells.
Mycobacterium abscessus é uma micobactéria de crescimento rápido (MCR), responsável por infecções da pele e tecidos moles e doença pulmonar, especialmente em pacientes com fibrose cística. Desde 1998, vários surtos de infecção localizada causados por membros do grupo M. chelonae-M. abscessus foram reconhecidos em pacientes submetidos a procedimentos invasivos no Brasil. O estudo do comportamento intracelular de M. abscessus em células hospedeiras diversas, quanto à espécie e tipo celular, pode fornecer uma visão mais detalhada sobre o estado fisiológico, composicional, fusional e funcional de fagossomos contendo micobactérias, ajudando a entender o comportamento biológico durante a infecção bacteriana. Este trabalho teve como objeto de estudo o isolado de M. abscessus subsp bolletii CRM0019, associado a um surto de infecções que acometeram pacientes em diferentes Estados do Brasil entre 2004 e 2008, em comparação com a cepa de referência ATCC 19977 (M. abscessus subsp. abscessus). O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o comportamento intracelular da cepa CRM0019 em células A549, RAW e macrófagos derivados de medula óssea (MDMO), utilizando como ferramentas imunofluorescência, citometria de fluxo e contagem de unidades formadoras de colônias. Observamos que M. abscessus CRM0019 possui um fenótipo próximo ao de micobactérias patogênicas em células A549, sobrevivendo e multiplicando-se uma vez internalizada. Tal característica da cepa não se repetiu em células macrofágica. Com a cepa de referência ATCC19977 não observamos multiplicação intracelular, mas sim sobrevivência. CRM0019 e ATCC19977 obtidas de infecção prévia em macrófagos apresentaram sobrevivência maior ao serem reinfectadas em MDMO e A549. O uso de citometria de fluxo se mostrou ineficaz para avaliar o desenvolvimento intracelular de M. abscessus em célula A549, mas indicou uma possível ultiplicação em células RAW. Palavras-
Mycobacterium abscessus é uma micobactéria de crescimento rápido (MCR), responsável por infecções da pele e tecidos moles e doença pulmonar, especialmente em pacientes com fibrose cística. Desde 1998, vários surtos de infecção localizada causados por membros do grupo M. chelonae-M. abscessus foram reconhecidos em pacientes submetidos a procedimentos invasivos no Brasil. O estudo do comportamento intracelular de M. abscessus em células hospedeiras diversas, quanto à espécie e tipo celular, pode fornecer uma visão mais detalhada sobre o estado fisiológico, composicional, fusional e funcional de fagossomos contendo micobactérias, ajudando a entender o comportamento biológico durante a infecção bacteriana. Este trabalho teve como objeto de estudo o isolado de M. abscessus subsp bolletii CRM0019, associado a um surto de infecções que acometeram pacientes em diferentes Estados do Brasil entre 2004 e 2008, em comparação com a cepa de referência ATCC 19977 (M. abscessus subsp. abscessus). O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o comportamento intracelular da cepa CRM0019 em células A549, RAW e macrófagos derivados de medula óssea (MDMO), utilizando como ferramentas imunofluorescência, citometria de fluxo e contagem de unidades formadoras de colônias. Observamos que M. abscessus CRM0019 possui um fenótipo próximo ao de micobactérias patogênicas em células A549, sobrevivendo e multiplicando-se uma vez internalizada. Tal característica da cepa não se repetiu em células macrofágica. Com a cepa de referência ATCC19977 não observamos multiplicação intracelular, mas sim sobrevivência. CRM0019 e ATCC19977 obtidas de infecção prévia em macrófagos apresentaram sobrevivência maior ao serem reinfectadas em MDMO e A549. O uso de citometria de fluxo se mostrou ineficaz para avaliar o desenvolvimento intracelular de M. abscessus em célula A549, mas indicou uma possível ultiplicação em células RAW. Palavras-
Descrição
Citação
RIBEIRO, Giovanni Monteiro. Estudo do comportamento intracelular de mycobacterium abscessus subspBolletii crm0019. 2014. 77 f. Dissertação (Mestrado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2014.