Expressao de genes que codificam antigenos imunodominantes de TRypanosoma cruzi em bacterias recombinantes
Data
1997
Autores
Yamauchi, Lucy Megumi 
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Utilizamos as tecnicas de DNA recombinante para expressar antigenos de T. cruzi com potencial diagnostico em bacterias recombinantes. Genes que codificam antigenos imunodominantes parasitarios (H49, JL7, JL8, A13 e B13) foram subclonados no vetor de expressao, plasmidio pGEX, e expressos como proteinas em fusao com a glutationa S-transferase. As proteinas recombinantes foram produzidas em larga escala e com grau de pureza aceitavel. Os antigenos recombinantes reagem especificamente em teste de ELISA com soros de pacientes chagasicos e nao apresentam reacao cruzada com soros de pacientes de outras doencas parasitarias. Nossos resultados sugerem que as proteinas recombinantes podem proporcionar a base para testes de diagnostico especificos para doenca de Chagas. O sistema de expressao glutationa S-transferase tambem foi utilizado para expressar antigenos de superficie estagio-especificos de formas tripomastigota de T. cruzi (gp90 e gp82). As proteinas recombinantes eram parcialmente insoluveis e nao puderam ser purificada eficientemente do extrato celular por cromatografia de afinidade. Desenvolvemos um protocolo para purificar as proteinas recombinantes de geis de poliacrilamida-SDS preparativos por eluicao com detergentes e tampoes apropriados. As proteinas recombinantes eluidas foram utilizadas em ensaios biologicos. Para identificar o dominio antigenico reconhecido pelo anticorpo monoclonal 3F6 dentro do antigeno de superficie gp82, um grupo de subfragmentos derivados do gene MTS-gp82 foi expresso como proteinas de fusao no sistema pGEX e analisadas em ensaios de owestern bloto com o anticorpo monoclonal 3F6. O dominio antigenico reconhecido pelo anticorpo monoclonal 3F6 foi mapeado em uma regiao de 200 aminoacidos localizada no dominio carboxi-terminal da gp82 (entre os aminoacidos 302-502). Nossos resultados indicam que o sistema de expressao bacteriana pGEX e apropriado para a producao de antigenos em grandes quantidades e qualidade. As proteinas recombinantes podem representar ferramentas valiosas para o diagnostico e estudos biologicos de parasitoses
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 1997. 80 p.