Estudo dos efeitos da radiação na estrutura de alguns peptídeos de relevância biológica
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Data
2009-07-29
Autores
Nardi, Daniela Teves [UNIFESP]
Orientadores
Nakaie, Clovis Ryuichi [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Resumo
Os produtos de reações e os mecanismos envolvidos na radiólise de macromoléculas de relevância fisiológica têm sido objetos de diversos estudos. Estes fatores são conhecidos por atuarem em diversos tipos de patologias no organismo humano. Como uma das fontes de geração de radicais livres em solução pode ser obtida pela ação da radiação ionizante, decidiu-se nesta tese, avaliar-se o efeito da irradiação de alguns peptídeos de importância fisiológica. A parte preponderante deste trabalho envolveu o estudo dos peptídeos vasoativos angiotensina II (DRVYIHPF, AngII) e bradicinina (RPPGFSPFR, BK). Foram realizadas irradiações com doses variando entre 1 e 15 kGy, nas quais foram observadas uma progressiva degradação de suas estruturas em função da dose de radiação. Notou-se neste processo, a formação de subprodutos que foram purificados e caracterizados por diferentes procedimentos experimentais dentre os quais: HPLC, análise de aminoácidos e espectrometria de massa, e sequenciamento de aminoácidos. Além destes, foram também realizados ensaios de dicroísmo circular (CD) e atividade biológica (contrações musculares). No estudo da AngII, foram isolados três análogos: Tyr 8 -AngII, m-Tyr 8 -AngII, e Lys 6 -AngII. Quanto ao estudo da BK, notou-se novamente a transformação do resíduo de Phe em Tyr e m-Tyr, mas apenas ocorrendo com o resíduo de Phe 8 e não Phe 5 da estrutura da BK. Este dado, de grande relevância, indica que o efeito da radição é sequência dependente. Vale a pena ressaltar que não se observou alterações simultâneas tanto na AngII quanto na BK. Os produtos isolados sempre contiveram apenas uma destas alterações mencionadas. Além destes peptídeos, foram estudados em caráter preliminar, a angiotensina I (DRVYIHPFHL, AngII, o hormônio liberador de melanócito (acetil-SYSMEHFRWGKV- amida, α-MSH), e dois análogos marcados com o spin label TOAC (ácido 2,2,6,6- tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxílico) na posição 1 (AngII) e na posição 3 (BK). Em comum, todos os peptítdeos mostraram uma degradação não linear e em função da dose de radiação. Observou-se também um acréscimo de massa de 16 Da em relação ao peptídeo nativo nos subprodutos encontrados nos peptídeos que apresetaram a formação de subprodutos. Foi também realizado um estudo com soluções equimolares de L-aminoácidos livres no qual foi observado apenas um decréscimo dose-dependente dos aminoácidos Cys e Met, nas condições estudadas. Em conclusão, este tipo de projeto de pesquisa parece ser promissor no sentido de poder-se continuar com os estudos já iniciados e que poderão levar a um esclarecimento mais aprofundado do efeito da irradiação e, por conseguinte, do mecanismo de ação dos radicais livres gerados em solução. Estes achados poderão ser, portanto, relevantes para estudos de diferentes tipos de processos fisiológicos que ocorrem no organismo animal. Além do mais, esta estratégia experimental desenvolvida no presente estudo, pode ser de grande relevância para a produção de novas drogas terapêuticas, pois como foi observado, podem se gerar derivados peptídicos não usuais e, portanto de difícil obtenção pelos métodos convencionais envolvendo a síntese de peptídeos (e por extensão, de proteínas)
Descrição
Citação
NARDI, Daniela Teves. Estudo dos efeitos da radiação na estrutura de alguns peptídeos de relevância biológica. 2009. Tese (Doutorado) - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2009.