Obtenção e caracterização de Células Dendríticas diferenciadas a partir da linhagem monocítica THP-1

Abstract

Introdução: As Células dendríticas (DCs) são células apresentadoras de antígenos profissionais do sistema imune inato e são a chave entre o sistema inato e adaptativo. Elas são especializadas em capturar, processar e apresentar antígenos para os linfócitos, via o complexo de histocompatibilidade maior (MHC) e moléculas coestimulatórias, o que permite a montagem da resposta imune celular e humoral. Estudos in vitro com DCs ocorrem pela diferenciação de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs), utilizando amostras de doadores saudáveis, o que é um processo laborioso e que gera variabilidade nos resultados. Nesse contexto, a diferenciação da linhagem monocítica THP-1 ainda é pouco explorada para a diferenciação em DCs. Objetivo: Desenvolver um protocolo para obtenção de DCs a partir de THP-1 e avaliar a resposta funcional dessas células frente ao estímulo LPS ou cAmbly (domínio C-terminal sintético da proteína Amblyomin-X). Metodologia: Células THP-1 foram cultivadas em meio RPMI + IL-4/GM-CSF (1000 U/ml) por 3h e adicionado PMA (10 nM) por 24h. Após esse período, o mesmo foi substituído por meio contendo somente as citocinas e incubado por mais 48h. Análises morfológica, fenotípica e funcional foram realizadas pelas técnicas de High Content Screening (HCS), citometria de fluxo por imagem, confocal, multiplex e RT-PCR, respectivamente. Resultados: As DCs diferenciadas a partir de THP-1 (THP-1-DCs) expressaram aumento de DC-SIGN, um marcador característico de DCs, quando comparado com THP-1 e THP-1-Macrofágo (THP-1-MØ), além de morfologia compatível com DCs. Após ativação com LPS houve aumento de expressão das moléculas CD80, CD86 e CD83, das citocinas IL-6, TNF-α, IL-1β, VEGF e MIP1α e β, modulação de genes das vias inflamatórias e redução da fagocitose de corpos apoptóticos de células tumorais. Em reposta ao cAmbly houve aumento de CD86, expressão gênica de MDA5, mas sem mudanças morfológicas ou modulação de citocinas. Conclusão: O aumento de DC-SIGN e a mudança morfológica confirmam a diferenciação em DCs. Assim como, aumento de moléculas coestimulatórias e citocinas, modulação gênica de fatores de transcrição e redução da capacidade fagocítica quando estimulada e comparada com o controle em resposta aos estímulos confirmam a funcionalidade do modelo THP-1-DCs. A obtenção de DCs derivada de THP-1 fornece uma poderosa ferramenta com alternativa para obtenção de DCs.