Aplicação de isoforma de lacase purificada de meio de cultura do fungo endofítico xylaria sp. para promoção de crosslinking in vitro em córneas de abatedouro

Lins, Bruna Vitoria Oliveira [UNIFESP]; Scomparim, Giulia [UNIFESP]; Kim, Steffany Ji Hee [UNIFESP]

Aplicação de isoforma de lacase purificada de meio de cultura do fungo endofítico xylaria sp. para promoção de crosslinking in vitro em córneas de abatedouro

Arquivos

TRABALHO DE PRODUCAO INTELECTUAL.pdf(1.33 MB)

Data

2023-01-16

Autores

Lins, Bruna Vitoria Oliveira

Scomparim, Giulia

Kim, Steffany Ji Hee

Orientadores

Schor, Paulo

Tipo

Trabalho de conclusão de curso

Resumo

O ceratocone é uma doença corneana progressiva, bilateral e assimétrica, caracterizada por afinamento estromal e subsequente ectasia da córnea central e paracentral, com protrusão cônica, que provoca astigmatismos irregulares e miopia e proporciona baixa acuidade visual. As alterações visuais decorrentes desta ectasia podem ser controladas de diferentes formas, a depender da sua progressão. Neste contexto, o corneal crosslinking (CXL) permite estabilizar a progressão do ceratocone em córneas onde não há afinamento severo, utilizando a riboflavina como fotossensibilizador, seguida de exposição à luz ultravioleta A (UVA), para melhorar a estabilidade biomecânica e a resistência enzimática da córnea, retardando ou interrompendo a progressão da condição através da indução de ligações cruzadas no estroma. Entretanto, alguns estudos têm associado diversas complicações ao método convencional de CXL, tais como a perda e polimorfismos de queratócitos, perda de células endoteliais, com danos estruturais e funcionais persistentes, opacificações e perfurações de córnea, achatamento e ceratite secundária. Portanto, métodos alternativos para a obtenção de ligações cruzadas no estroma devem ser considerados, como por exemplo através de oxidorredutases, enzimas que catalisam reações de oxi-redução formando ligações cruzadas covalentes em proteínas, como o colágeno. Neste contexto, a enzima lacase surge como um composto natural com atividade potencial para a promoção de ligações cruzadas em córneas, apresentando, ao mesmo tempo, efeito citotóxico muito reduzido, e portanto, maior viabilidade de aplicação. Dessa forma, no presente estudo, obteve-se a enzima lacase por fermentação do fungo endofítico Xylaria sp., seguida de sua purificação e aplicação em crosslinking in vitro de córneas de porco de abatedouro. As córneas foram, então, caracterizadas por resistência à degradação enzimática e perfil de desnaturação térmica por calorimetria exploratória diferencial (DSC) para avaliar o potencial da lacase como um método alternativo ao CXL tradicional. Nossos resultados demonstram que o uso da enzima lacase em combinação com uma molécula fenólica, a catequina, possui grande potencial na formação de ligações cruzadas in vitro, reduzindo a taxa de degradação enzimática por colagenase e aumentando a temperatura de desnaturação em ensaios de DSC. Isoladamente, a lacase produzida pelo fungo endofítico Xylaria sp., quando comparada à comercial (Sigma-Aldrich), vii possui atividade de reticulação inferior. Entretanto, a combinação das lacases e catequina, apresentou níveis similares de atividade, sem diferenças estatisticamente significativas entre os grupos, demonstrando que a enzima produzida em nosso projeto é igualmente funcional à comercial, quando utilizadas concomitantemente à catequina, e que possui potencial considerável na promoção de ligações cruzadas no estroma, sendo uma alternativa interessante ao método de CXL.