Ciclofilinas na biologia do Paracoccidioides brasiliensis: estudos in vitro e in silico.

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Data
2022-11-09
Autores
Dias, Natália Aparecida Vasconcelos [UNIFESP]
Orientadores
Campos, Claudia Barbosa Ladeira de [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Objetivo: O objetivo principal deste trabalho foi elucidar as possíveis funções das ciclofilinas na biologia do Paracoccidioides brasiliensis através de experimentos in vitro e in silico. Métodos: Os métodos in vitro foram realizados em três experimentos em duplicata de culturas de células de leveduras de P. brasiliensis com três grupos (CTR, CsA e Debio) a 37°C. Foram realizados experimentos de Perfil de crescimento celular utilizando a densidade óptica ao longo dos dias de cultura, experimentos de análise de estabilidade farmacológica e coloração dos corpúsculos lipídicos. Os experimentos de transição morfológica também seguiram os grupos descritos acima, porém a temperatura de cultura foi de 25°C para 37°C após a divisão dos grupos de estudo. Foram realizadas análises das fases de transição morfológica e também a coloração com oil red O. O trabalho com análise de bancos de dados abertos foi realizada utilizando a ferramenta blastx, blastp do NCBI e a ferramenta Align do site uniprot.org. Resultados: As leveduras tratadas com CsA apresentaram crescimento significativamente inferior que o grupo CTR, enquanto o grupo Debio apresentou diferença sutil no crescimento quando comparado ao grupo CTR. A estabilidade farmacológica da CsA é alta mesmo em pouco tempo de exposição ao fármaco. A transição M-L foi afetada no grupo tratado com CsA, enquanto o grupo Debio apresentou resultados próximos ao CTR. A busca pelas ciclofilinas do gênero Paracoccidioides encontrou 10 ciclofilinas por isolado/espécie. Conclusão: A inibição da calcineurina e ciclofilinas pela CsA apresenta respostas biológicas mais expressivas ao P. brasiliensis, o que sugere um papel mais relevante da calcineurina no crescimento celular, manutenção dos CL e transição morfológica. Os fungos do gênero Paracoccidioides apresentam dez ciclofilinas homólogas entre si e possuem organização gênica idêntica, porém com regulação da expressão diferente.
Objective: The main objective of this work was to elucidate the possible functions of cyclophilins in the biology of Paracoccidioides brasiliensis through in vitro and in silico experiments. Methods: In vitro methodology was performed using P. brasiliensis yeast cell cultures in three experiments with three groups (CTR, CsA, and Debio) in each one. All assays were made in duplicate and at 37°C. Cell growth profile experiments were performed using optical density over the days of culture, pharmacological stability analysis, and staining of lipid bodies. The morphological transition experiments also followed the groups described above, but the culture temperature went from 25°C to 37°C after the division of the study groups. Analyzes of the morphological transition phases and also staining with oil red O were performed. The work with analysis of open databases was performed using the blastx tool, blastp from NCBI, and the Align tool from the uniprot.org website. Results: The yeasts treated with CsA showed significantly lower growth than the CTR group, while the Debio group showed a subtle difference in growth when compared to the CTR group. The pharmacological stability of CsA is high even in a short time of drug exposure. The M-L transition was affected in the group treated with CsA, while the Debio group presented results close to the CTR. The search for cyclophilins of the genus Paracoccidioides found 10 cyclophilins per isolate/species. Conclusion: The inhibition of calcineurin and cyclophilins by CsA exhibits more expressive biological responses to P. brasiliensis, which suggests a more relevant role of calcineurin in cell growth, maintenance of CL, and morphological transition. Fungi of the genus Paracoccidioides have ten cyclophilins that are homologous to each other and have identical gene organization, but with different expression regulations.
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