Comprovação de claim de ativos cosméticos in vitro utilizando modelo tridimensional de cultura celular em adipócitos
Data
2020-03-23
Autores
Ueoka, Andreza Rodrigues 
Orientadores
Lopes, Patricia Santos
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
In vitro safety and efficacy assesment models of cosmetic actives are increasingly popular as there is a ban on the use of animals in 39 countries and some Brazilian states. In this context, a new in vitro model of three-dimensional coculture of adipose and endothelial cells was proposed for the in vitro safety assessment and proof of efficacy for improvement skin appearence of cellulite and aged skin. The safety trials of the assets Centella asiatica, horse chestnut, witch hazel, caffeine, Blend and Ecoblend were performed by cytotoxicity assays in three different types of cells strains, phototoxicity, genotoxicity with flow cytometry method and cytotoxicity in three-dimensional coculture of adipose and endothelial cells and the efficacy assay was performed by the Oil Red O method in single-layer cells and three-dimensional coculture. The results showed that the active Centella asiatica, Blend and caffeine in the concentration 2.5% were more cytotoxic in endothelial cells than in Balb/c 3T3 cells, since they provided a decreasement of about 10%, 98% and 20%, respectively. In the cytotoxicity assay, the active Centella asiatica, witch hazel, Blend and caffeine at the concentration of 2.5% were more cytotoxic in 3T3-L1 cells than in Balb/c 3T3 cells, since they led to a decreasement of about 8%, 24%, 99% and 20%, respectively. None of the evaluated actives presented phototoxicity and genotoxicity. The three-dimensional coculture of adipose and endothelial cells presented greater cellular viability when compared to single-layer cells at the same concentration. In the efficacy test, the Centella asiatica, horse chestnut, witch hazel, caffeine and Blend in the highest test concentration caused a reduction in the amount of intracellular lipids around 40%, 12%, 27%, 35% and 30%, respectively. It was possible to conclude that the proposed model of three-dimensional co-culture for in vitro evaluation of safety and efficacy of cosmetic assets was effective and advantageous in relation to the 2D model, since it presents better representation of adipose tissue with concentrations closer to cell use and organization more similar to the in vivo system.
Os modelos de avaliação in vitro de segurança e eficácia de ativos cosméticos estão cada vez mais populares, uma vez que existe a proibição do uso de animais em 39 países e alguns estados brasileiros. Nesse contexto, foi proposto um novo modelo in vitro de co-cultura tridimensional de células adiposas e endoteliais para a avaliação in vitro de segurança e comprovação de eficácia de ativos para a melhora da aparência da pele com celulite e envelhecida. Os ensaios de segurança dos ativos Centella asiatica, castanha da índia, hamamélis, cafeína, Blend e Ecoblend foram realizados por meio de ensaios de citotoxicidade em três células de linhagens diferentes assim como afototoxicidade e genotoxicidade pelo método de citometria de fluxo. A citotoxicidade na co-cultura tridimensional de células adiposas e endoteliais e o ensaio de eficácia foram realizados pelo método de Oil Red O em células de monocamada e co-cultura tridimensional. Os resultados mostraram que os ativos Centella asiatica, Blend e cafeína na concentração 2,5% foram mais citotóxicas em células endoteliais do que nas células Balb/c 3T3, uma vez que proporcionaram um decaimento de cerca de 10%, 98% e 20%, respectivamente. No ensaio de citotoxicidade em células adiposas os ativos Centella asiatica, hamamélis, Blend e cafeína na concentração de 2,5% foram mais citotóxicas em células 3T3-L1 do que nas células Balb/c 3T3, visto que levaram a um decaimento de cerca de 8%, 24%, 99% e 20%, respectivamente. Nenhum dos ativos avaliados apresentou fototoxicidade e genotoxicidade. A co-cultura tridimensional de células adiposas e endoteliais apresentou maior viabilidade celular quando comparada com as células em monocamada na mesma concentração. No ensaio de comprovação de eficácia, os ativos Centella asiatica, castanha da índia, hamamélis, cafeína e Blend na maior concentração teste causaram reduçãoda quantidade de lipídios intracelulares em torno de 40%, 12%, 27%, 35% e 30%, respectivamente. Foi possível concluir que, o modelo proposto de co-cultura tridimensional para avaliação in vitro de segurança e eficácia de ativos cosméticos foi efetivo e vantajoso em relação ao modelo 2D, uma vez que apresenta melhor representaçãodo tecido adiposo com concentrações mais próximas a de uso eorganização celular mais semelhantes ao sistema in vivo.
Os modelos de avaliação in vitro de segurança e eficácia de ativos cosméticos estão cada vez mais populares, uma vez que existe a proibição do uso de animais em 39 países e alguns estados brasileiros. Nesse contexto, foi proposto um novo modelo in vitro de co-cultura tridimensional de células adiposas e endoteliais para a avaliação in vitro de segurança e comprovação de eficácia de ativos para a melhora da aparência da pele com celulite e envelhecida. Os ensaios de segurança dos ativos Centella asiatica, castanha da índia, hamamélis, cafeína, Blend e Ecoblend foram realizados por meio de ensaios de citotoxicidade em três células de linhagens diferentes assim como afototoxicidade e genotoxicidade pelo método de citometria de fluxo. A citotoxicidade na co-cultura tridimensional de células adiposas e endoteliais e o ensaio de eficácia foram realizados pelo método de Oil Red O em células de monocamada e co-cultura tridimensional. Os resultados mostraram que os ativos Centella asiatica, Blend e cafeína na concentração 2,5% foram mais citotóxicas em células endoteliais do que nas células Balb/c 3T3, uma vez que proporcionaram um decaimento de cerca de 10%, 98% e 20%, respectivamente. No ensaio de citotoxicidade em células adiposas os ativos Centella asiatica, hamamélis, Blend e cafeína na concentração de 2,5% foram mais citotóxicas em células 3T3-L1 do que nas células Balb/c 3T3, visto que levaram a um decaimento de cerca de 8%, 24%, 99% e 20%, respectivamente. Nenhum dos ativos avaliados apresentou fototoxicidade e genotoxicidade. A co-cultura tridimensional de células adiposas e endoteliais apresentou maior viabilidade celular quando comparada com as células em monocamada na mesma concentração. No ensaio de comprovação de eficácia, os ativos Centella asiatica, castanha da índia, hamamélis, cafeína e Blend na maior concentração teste causaram reduçãoda quantidade de lipídios intracelulares em torno de 40%, 12%, 27%, 35% e 30%, respectivamente. Foi possível concluir que, o modelo proposto de co-cultura tridimensional para avaliação in vitro de segurança e eficácia de ativos cosméticos foi efetivo e vantajoso em relação ao modelo 2D, uma vez que apresenta melhor representaçãodo tecido adiposo com concentrações mais próximas a de uso eorganização celular mais semelhantes ao sistema in vivo.