Avaliar o efeito do receptor P2X 7 no sistema renina- angiotensina durante a progressão da nefropatia diabética

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Data
2020-01-30
Autores
Nascimento, Moises [UNIFESP]
Orientadores
Higa, Elisa Mieko Suemitsu [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Aim: To analyze the effect of P2X7 receptor on RAS in DN. Methods: Uninephectomized male Wistar rats received a single dose of streptozotocin (60 mg/kg, i.v) for diabetes mellitus (DM) induction; control animals (CTL) received the drug vehicle. The animals were submitted to P2X7 receptor silencing with single puncture directly in the kidneys, forming the group (DM+siRNA). The animals were placed in metabolic cages before and after the protocol, for data collection and evaluation of renal function; at the end of the protocol, the animals were sacrificed and the kidney was removed for protein content analysis of P2X7R, renin, angiotensin- converting enzyme (ACE) and ACE2. RAS enzyme activity, thiobarbituric acid reactive substance levels (TBARS) and nitric oxide (NO) were analyzed; qualitative histological analysis was also performed on renal tissue. Data were expressed as mean ± standard error, with significance for p<0.05. Results: The metabolic profile was improved in DM+siRNA vs. DM; there was a significant improvement in creatinine and plasmatic urea and proteinuria levels in DM+siRNA vs. DM. The P2X7R interference mRNA decrease about 55% in the DM+siRNA group vs. DM. Regarding protein content, renin showed a significant increase between DM vs. CTL and DM+siRNA vs. DM; ACE increased significantly in DM vs. CTL, with significant reduction in DM+siRNA vs. DM; angiotensin showed a significant increase in the DM vs. CTL and reduced in DM+siRNA vs. DM; ACE2 was significantly reduced in DM+siRNA vs. DM. Regarding renin enzymatic activity, there was a significant increase in DM vs. CTL, with significant reduction in DM+siRNA vs. DM; ACE and ACE2 were not different between groups. In renal tissue, TBARS increased significantly in DM vs. CTL, with significant decrease in DM+siRNA group vs. DM; On the other hand, NO showed a reduction in the DM group vs. CTL and increase in DM+siRNA group vs. DM, both statistically significant. Histological analysis of renal tissue by hematoxylin-eosin (HE) showed glomeruli with increased cellularity; in the tubules, focal vacuolization was observed in DM vs. CTL, with reduction of these changes in DM+siRNA vs. DM. In periodic acid-Schiff (PAS), DM group presented glomeruli with discrete areas of diffuse sclerosis and tubules with hyaline goticular and glycosidic degeneration, with loss of brush border; however, these were lower in DM+siRNA. Conclusion: The data show that although P2X7R silencing did not decrease fasting glucose, it promoted an improvement in the metabolic profile of diabetic animals and a significant recovery of renal function, revealing a protective action by inhibition of this receptor.On the renal tissue, histological findings revealed a reduction in DM damage to renal glomeruli and tubules. One of the most important aspects of our study showed that P2X7R silencing was able to decrease ACE and increase NO, suggesting that the use of P2X7R inhibitors or blockers could be used as an adjuvant therapy against the progression of DN; however, more studies are needed to elucidate these mechanisms.
Objetivos: Analisar o efeito do receptor P2X 7 sobre o SRA na ND em ratos. Metodologia: Ratos Wistar machos uninefrectomizados foram submetidos à única aplicação de estreptozotocina (60 mg/kg, i.v.) para indução do diabetes mellitus (DM), os animais do grupo controle (CTL) receberam o veículo da droga. Os animais foram submetidos ao silenciamento do receptor P2X 7 com punção única diretamente nos rins, formando o grupo (DM+siRNA). Antes e após o protocolo, os animais foram colocados em gaiolas metabólicas para coleta de dados e avaliação da função renal; no final do protocolo, os animais foram eutanasiados e o rim foi removido para análise do conteúdo proteico do P2X 7 , renina, enzima conversora de angiotensina (ECA) e ECA2; foram analisadas a atividade das enzimas do SRA, os níveis das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e o óxido nítrico (NO); ainda foi realizada a análise histológica qualitativa no tecido renal. Os dados foram expressos em média ± erro padrão, com significância para p &lt;0,05. Resultados: O perfil metabólico apresentou melhora no grupo DM+siRNA vs. DM; houve significante melhora nos níveis de creatinina, ureia plasmáticos e proteinúria no grupo DM+siRNA vs. DM. O mRNA de interferência do receptor P2X 7 foi capaz de inibir o receptor em 55% no grupo DM+siRNA vs. DM; em relação ao conteúdo proteico, a renina apresentou aumento significante entre os grupos DM vs. CTL e DM+siRNA vs. DM; a ECA aumentou significantemente no grupo DM vs. CTL, com redução significante no DM+siRNA vs. DM; a angiotensina apresentou aumento significante no grupo DM vs. CTL e tendência de redução no grupo DM+siRNA vs. DM; a ECA2 estava significantemente reduzida no grupo DM+siRNA vs. DM. Quanto à atividade enzimática, a renina apresentou aumento significante no grupo DM vs. CTL, com redução significante no grupo DM+siRNA vs. DM; a atividade da ECA e ECA2 não apresentaram diferença estatística entre os grupos. No tecido renal, o TBARS estava significantemente aumentado no grupo DM vs. CTL, com diminuição significante no DM+siRNA vs. DM; ao contrário, o NO no tecido renal apresentou redução no grupo DM vs. CTL e, aumento no DM+siRNA vs. DM, ambos estatisticamente significantes. A análise histológica do tecido renal por hematoxilina- eosina (HE) apresentou aumento da celularidade nos glomérulos; nos túbulos foi observado vacuolização focal no grupo DM vs. CTL, com redução dessas alterações no grupo DM+siRNA vs. DM. Na coloração do reagente periódico ácido-Schiff (PAS) foram observadas ocorrência de esclerose difusa e aumento na matriz mesangial nos glomérulos e túbulos com degeneração glicosídica e hialínico goticular, com ausência de borda em escova nos grupos diabéticos; contudo, estas marcações estavam em menor intensidade no grupo DM+siRNA. Conclusão: Os dados mostraram que embora o silenciamento do receptor P2X 7 não tenha diminuído a glicemia de jejum, promoveu uma melhora no perfil metabólico dos animais diabéticos e uma significante recuperação da função renal, revelando ação renoprotetora via inibição desse receptor. No tecido renal, os achados histológicos revelaram redução dos danos causados pelo DM nos glomérulos e nos túbulos renais. Um dos aspectos mais importantes do nosso estudo foi que o silenciamento do receptor P2X 7 foi capaz de diminuir a ECA e aumentar o NO, sugerindo que o uso de inibidores ou bloqueadores do receptor P2X 7 poderia ser utilizado como uma terapia coadjuvante contra a progressão da ND, contudo, mais estudos são necessários para elucidar esses mecanismos.
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