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dc.contributor.advisorSalomão, Reinaldo [UNIFESP]
dc.contributor.authorSousa, Mônica Bragança [UNIFESP]
dc.coverage.spatialSão Paulopt_BR
dc.date.accessioned2022-05-02T19:42:11Z
dc.date.available2022-05-02T19:42:11Z
dc.date.issued2022-03-31
dc.identifier.citationSOUSA, Mônica Bragança. Alterações do metabolismo energético em células mononucleares de sangue periférico tolerantes à endotoxina. São Paulo, 2021. 61 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Translacional) - Escola Paulista de Medicina (EPM), Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2022.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/63786
dc.description.abstractObjetivo: Analisar como o metabolismo celular está relacionado à função de células mononucleares de sangue periférico tolerantes à endotoxina, importante modelo que, em certos aspectos, é semelhante à imunomodulação que ocorre em leucócitos de pacientes sépticos. Métodos: Amostras de sangue foram obtidas de voluntários sadios, processadas para separação das células mononucleares de sangue periférico (PBMC), pré-estimuladas por 48h com lipopolissacarídeo (LPS) (10 ng/mL e 100 ng/mL) ou cultivadas em meio de cultura e incubadas com uma dose desafio de LPS (100 ng/mL) ou em meio por 24h. A indução de tolerância foi avaliada pela produção de TNF-α por citometria de fluxo. A atividade metabólica foi analisada pela quantificação de ATP utilizando um kit comercial, pela captação de glicose por citometria de fluxo e pela quantificação de lactato no sobrenadante de cultura. O efeito da inibição das vias metabólicas na função celular foi avaliado na fagocitose, produção de ATP e citocinas utilizando um inibidor específico para cada via alvo. Resultados: PBMC pré-estimuladas com LPS apresentaram inibição da produção de TNF-α com a dose desafio, especialmente aquelas pré-estímuladas com 100 ng/mL de LPS, confirmando a indução de tolerância. Células que receberam o pré-estímulo e foram desafiadas com LPS apresentaram aumento na produção de ATP quando comparadas às não estimuladas. PBMC estimuladas apenas com a segunda dose de LPS apresentaram, como esperado, transição metabólica para glicólise, com aumento na captação de glicose e aumento na produção de lactato. Já as células tolerantes ao LPS apresentaram uma redução na produção de lactato ao serem desafiadas sem, contudo, apresentarem redução na captação de glicose. A produção de ATP foi comprometida apenas na presença de oligomicina, enquanto a fagocitose e a produção de citocinas foram reduzidas com a inibição tanto da glicólise quanto da via das pentoses fosfato, sem alteração causada pela oligomicina. Conclusão: Células tolerantes ao LPS, apresentam produção reduzida de TNF-α, aumento na produção de ATP e redução na produção de lactato, sem alteração na captação de glicose. Indicando que células tolerantes à endotoxina não apresentam transição do metabolismo para glicólise quando desafiadas com LPS. Além disso a atividade celular é afetada pela inibição do metabolismo o que configura uma regulação metabólica da função, o que corrobora com o conceito de imunomodulação.pt_BR
dc.description.abstractObjective: To analyze how cellular metabolism is related to the function of endotoxin-tolerant peripheral blood mononuclear cells, an important model that, in certain aspects, is similar to the immunomodulation that occurs in leukocytes from septic patients. Methods: Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained from blood samples donated by healthy volunteers, pre-stimulated for 48h with lipopolysaccharide (LPS) (10 ng/mL and 100 ng/mL) or in culture medium and incubated with a challenge dose of LPS (100 ng/mL) or in medium for 24h. Tolerance induction was assessed by the production of TNF-α by flow cytometry. Metabolic activity was analyzed by quantification of ATP using a commercial kit, by glucose uptake measured by flow cytometry and by quantification of lactate in the culture supernatant. The effect of inhibition of metabolic pathways on cellular function was evaluated on phagocytosis, ATP and cytokine production using a specific inhibitor for each target pathway. Results: PBMC pre-stimulated with LPS showed inhibition of TNF-α production with the challenge dose, especially those pre-stimulated with 100 ng/mL of LPS, confirming the induction of tolerance. Cells that received the pre-stimulus and were challenged with LPS showed an increase in ATP production when compared to the unstimulated cells. PBMC stimulated only with the second dose of LPS showed, as expected, a metabolic transition to glycolysis, with an increase in glucose uptake and an increase in lactate production. On the other hand, LPS-tolerant cells showed a reduction in lactate production when challenged without, however, showing a reduction in glucose uptake. ATP production was compromised only in the presence of oligomycin, while phagocytosis and cytokine production were reduced with inhibition of both glycolysis and the pentose phosphate pathway, without alteration caused by oligomycin. Conclusion: LPS-tolerant cells show reduced TNF-α production, increased ATP production and reduced lactate production, with no change in glucose uptake. Indicating that endotoxin-tolerant cells do not show transition from metabolism to glycolysis when challenged with LPS. In addition, cellular activity is affected by the inhibition of metabolism, which configures a metabolic regulation of function, corroborating the concept of immunomodulation.en
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)pt_BR
dc.format.extent61 f.pt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsAcesso restritopt_BR
dc.subjectTolerânciapt_BR
dc.subjectMetabolismopt_BR
dc.subjectImunotolerânciapt_BR
dc.subjectImunometabolismopt_BR
dc.subjectImunomodulaçãopt_BR
dc.titleAlterações do metabolismo energético em células mononucleares de sangue periférico tolerantes à endotoxinapt_BR
dc.title.alternativeChanges in energy metabolism in endotoxin-tolerant peripheral blood mononuclear cellsen
dc.typeDissertação de mestradopt_BR
dc.description.sponsorshipID2020/05077-5pt_BR
unifesp.campusEscola Paulista de Medicina (EPM)pt_BR
unifesp.graduateProgramMedicina Translacionalpt_BR
unifesp.knowledgeAreaImunologiapt_BR
unifesp.researchAreaImunometabolismopt_BR
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/5433893362681029pt_BR
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/8370334857007434pt_BR
dc.contributor.advisor-coFerreira, Bianca Rodrigues Lima [UNIFESP]
dc.contributor.advisor-coLatteshttp://lattes.cnpq.br/9037240776476396pt_BR


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