Caracterização funcional da membrana amniótica de gestantes com diabetes mellitus gestacional

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Date
2021-09-20Author
De Luccia, Thiago Paes de Barros [UNIFESP]
Advisor
Daher, Silvia [UNIFESP]Type
Tese de doutoradoMetadata
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Functional characterization of the amniotic membrane of pregnant women with gestational diabetes mellitusAbstract
Objetivo: Avaliar o perfil celular e funcional da membrana amniótica de
gestantes com diabetes mellitus gestacional (DMG) e normoglicêmicas, com o
intuito de relacionar eventuais alterações de padrão da doença. Casuística e
Métodos: Foram selecionadas 20 gestantes com DMG e 38 normoglicêmicas
Controles (CTL) submetidas à cesárea eletiva. Foram coletadas amostras de
sangue materno (SM) e do cordão umbilical (SF) para dosagem de citocinas,
quimiocinas e adipocinas. As membranas amnióticas foram dissecadas, parte
deste material foi congelado para estudo de expressão gênica, e o restante foi
cultivado para avaliação de mediadores, análise de permeabilidade e análise por
imunofluorescência. Resultados: Foram identificadas maiores concentração de
IL-10 e leptina em SF do grupo DMG. Não foram observadas correlações entre
os mediadores determinados nos diferentes compartimentos. Foram detectados
níveis mais elevados de IL-6 em sobrenadante de cultura de membrana (CM)
sem estímulo de gestantes com DMG. Na análise por imunofluorescência,
observamos que em DMG, a expressão de TNF-A e de IL-17 foi mais intensa
antes da cultura, do que nas CTL. As marcações de IL-10 e IL-17 também foram
mais intensas na estimulação por LPS em amostras de DMG. A distribuição de
TLR4 nas membranas com DMG foi mais heterogênea do que nas de CTL, mas
não houve diferença de intensidade de fluorescência entre os grupos. Houve
menor expressão de Claudina-4 em DMG antes da cultura. A membrana
amniótica das gestantes DMG foi mais permeável à fluoresceína do que as de
CTL. Conclusão: A membrana amniótica de gestantes com DMG apresentou
perfil discretamente inflamatório e mais permeável comparado as das CTL. Não
foi observada correlação entre os níveis de mediadores detectados nos três
compartimentos (SM, SF e CM) Objective: To evaluates the cellular and functional profile of the amniotic
membrane of pregnant women with gestational diabetes mellitus (GDM) and
normoglycemic patients, in order to relate possible changes in the pattern with the
development of the disease. Casuistry and Methods: 20 pregnant women with
GDM and 38 normoglycemic Controls (CTL) who underwent elective cesarean
section were selected. Samples of maternal blood (SM) and umbilical cord (SF)
were collected to measure cytokines, chemokines and adipokines. The amniotic
membranes were dissected, part of this material was frozen for study of gene
expression, and the rest was cultured for the evaluation of mediators, permeability
analysis and analysis by immunofluorescence. Results: Higher concentrations of IL10 and leptin in SF of the GDM group were identified. No correlations were
observed between the mediators determined in the different compartments. Higher
levels of IL-6 were detected in membrane culture supernatant (CM) without
stimulation of pregnant women with GDM. In the analysis by immunofluorescence,
we observed that in GDM, the expression of TNF--A and IL-17 was more intense
before culture, than in CTL. IL-10 and IL-17 markings were also more intense in
LPS stimulation in GDM samples. The distribution of TLR4 in membranes with
GDM was more heterogeneous than in those of CTL, but there was no difference in
fluorescence intensity between the groups. There was less expression of Claudin-4
in GDM before culture. The amniotic membrane of GDM pregnant women was
more permeable to fluorescein than those of CTL. Conclusion: The amniotic
membrane of pregnant women with GDM presented a slightly inflammatory and
more permeable profile compared to those of CTL. No correlation was observed
between the levels of mediators detected in the three compartments (SM, SF and
CM)