Avaliação Histofisiológica de testículo de rato com deficiência de citocinas induzida pela diacereína

Abstract

Introdução: A diacereína, um fármaco anti-inflamatório utilizado no tratamento da osteoartrite, inibe a ação de citocinas pró-inflamatórias, como a interleucina 1 (IL-1) e o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α). Embora ainda não esteja bem esclarecido, essas citocinas parecem participar do controle de algumas funções testiculares em condições normais. Objetivo: Considerando a importância das citocinas na histofisiologia testicular, foi proposto avaliar os macrófagos testiculares (MT), a atividade esteroidogênica das células de Leydig (CL) e a integridade dos túbulos seminíferos em testículos com deficiência de citocinas induzida por diacereína. Metodos: Os ratos receberam diariamente 100 mg/kg de diacereína (GDIA; n=8) ou solução salina (GC; n=8) por 30 dias. Os níveis séricos de testosterona (T) foram medidos e a área dos túbulos seminíferos (TS), área epitelial (AE), frequência de TS anormais e número de células de Sertoli (CS) foram avaliados. O método TUNEL e imunorreações para a detecção de pró-IL-1β, TNF-α, proteína reguladora aguda esteroidogênica (StAR), 17β-hidroxiesteroide desidrogenase (17β-HSD), receptor de andrógeno (AR) e receptor de captação de complexos haptoglobina-hemoglobina (CD163), um marcador de MT. Os níveis de AR testicular, 17β-HSD e IL-1β foram detectados por Western blot. Os dados foram submetidos ao Student t test (p≤0,05). Resultados e Discussão: No GDIA, os níveis de T, AR testicular, 17β-HSD e IL-1β diminuíram significantemente (p <0,05). O número de células intersticiais TUNEL-positivas aumentou e as CL mostraram fraca imunoexpressão de StAR, 17β-HSD e AR concomitantemente à uma redução na imunoexpressão de IL-1β e no número de MT CD163-positivos no tecido intersticial. Uma alta frequência de TS alterados foram encontrados no GDIA, além da redução na AE e aumento no número de células germinativas TUNEL-positivas. Foi também verificada uma redução no número de CS e fraca imunoexpressão de AR e TNF-α nas CS e células germinativas, respectivamente. Conclusão: A deficiência de citocinas induzida pela diacereína prejudica MT, as CL e a espermatogênese, e indica que a IL-1β participa do processo esteroidogênico em condições normais. Nos TS, a fraca imunoexpressão de AR e TNF-α nas CS e nas células germinativas, respectivamente, reforça a ideia de que o TNF-α desempenha um papel no controle androgênico da CS.

Introduction: Diacerein, an anti-inflammatory drug used for the treatment of osteoarthritis, inhibits IL-1 and TNF-α. Under physiological conditions, these cytokines seem to participate in the control of testicular functions, including spermatogenesis and steroidogenesis. Aim: Since cytokines are essential for the maintenance of testicular histophysiology, we evaluated testicular macrophages (TM), steroidogenesis by Leydig cells (LC) and seminiferous tubules integrity in cytokines deficient testes induced by diacerein, an anti-inflammatory drug. Methods: Male rats received 100 mg/kg of diacerein (DIAG; n=8) or saline (CG; n=8) for 30 days. Testosterone (T) serum levels were measured and the seminiferous tubule (ST) area, epithelial area (EA), frequency of damaged ST and number of Sertoli Cell (SC) were evaluated. TUNEL method (cell death) and immunoreactions for detection of IL-1β, TNF-α, steroidogenic proteins (StAR and 17β-HSD7) and TM marker (CD163) were performed; the immunofluorescent areas were measured. Testicular AR and IL-1β levels were detected by Western blot. Data were submitted to Student t test (p≤0.05). Results: In DIAG, T and testicular AR and IL-1β levels decreased significantly. Weak StAR, 17β-HSD7, IL-1β and CD163 immunoreactions were observed in interstitial cells. Numerous damaged ST and reduction in the EA were associated with intense germ cell death and reduced number of SC and TNF-α immunoexpression. Conclusion: Testicular IL-1β and TNF-α reduced significantly following diacerein treatment. The deficiency of these cytokines impaired TM, steroidogenesis and spermatogenesis. The damage to TM may be result of low steroidogenesis caused by IL-1 deficiency. Otherwise, considering TM-LC paracrine signaling, TM dysfunction may also be responsible for disrupted steroidogenesis. The low AR levels associated with SC and germ cell death may be caused by the weak TNF-α immunoexpression, suggesting that this cytokine seems to maintain spermatogenesis via androgenic control.