Efeito do miR-135b e miR-210 em células estromais mesenquimais na produção de vesículas extracelulares com fatores angiogênicos.

Efeito do miR-135b e miR-210 em células estromais mesenquimais na produção de vesículas extracelulares com fatores angiogênicos.

Alternative title Effect of miR-135b and miR-210 on mesenquimal stromal cells in the production of extracellular vesicles with angiogenic factors.
Author Vieira, Juliana Maíra Freitas Google Scholar
Advisor Han, Sang Won Autor UNIFESP Google Scholar
Graduate program Ciências Biológicas (Biologia Molecular)
Abstract Isquemia crítica de membros (CLI) é caracterizada pelo estreitamento das artérias dos membros inferiores. Os tratamentos disponíveis para CLI são limitados devido às comorbidades e idade avançada dos pacientes, motivando o desenvolvimento de novos tratamentos. Uma abordagem promissora é o uso de microRNAs para terapia angiogênica. Os microRNAs miR-135b e miR-210 são reguladores angiogênicos que têm um impacto importante nas vias de sinalização em resposta à hipóxia. Além disso, vesículas extracelulares (EVs) de células estromais mesenquimais (MSCs) são conhecidas por auxiliar na regeneração de tecidos após lesões isquêmicas e são potenciais veículos para a entrega de microRNAs. Neste estudo, foi verificado se a superexpressão de miR-135b ou miR-210 em MSCs pode produzir EVs enriquecidos com esses miRNAs e melhorar sua atividade angiogênica. Para tanto, MSCs de medula óssea de camundongos Balb/C foram transduzidas com um vetor lentiviral contendo um cassete de expressão gênica para miR-135b ou miR-210, e perfis de expressão de 20 genes e 12 microRNAs angiogênicos foram avaliados por RT-qPCR. EVs de MSCs foram isolados e purificados por ultracentrifugação e caracterizados por citometria de fluxo e NTA (Nanoparticle Tracking Analyzer). As concentrações de 12 microRNAs angiogênicos em EVs foram medidos por RT-qPCR e esses EVs foram usados ​​para avaliar a atividade pró-angiogênica em HUVECs. Como resultado, observamos que a modificação das MSCs com miR-210 ou miR-135b promoveu a superexpressão dos respectivos microRNAs. As MSCs com superexpressão de miR-135b apresentaram uma maior expressão de miR-210-5p e folistatina, uma glicoproteína associada à angiogênese e vasculogênese. MSCs superexpressando miR-210 tiveram regulação negativa de miR-221 e aumento de miR-296. Além disso, EVs derivados de MSCs modificados foram enriquecidos com ambos os miRNAs alvo e promoveram a formação de estruturas tubulares em HUVEC. Coletivamente, nossos resultados revelam que EVs podem ser enriquecidos com um angiomiR específico pela modificação de MSCs com um vetor lentiviral, e esses EVs mostraram atividades angiogênicas aumentadas, indicando uma estratégia interessante para terapia baseada em EV para doenças isquêmicas.

Critical Limb Ischemia (CLI) is characterized by narrowing of the arteries of the lower limbs. The available treatments for CLI are limited due to the comorbidities and advanced age of patients, motivating the development of new treatments. A promising approach is the use of microRNAs for angiogenic therapy. The miR-135b and miR-210 microRNAs are angiogenic regulators that have an important impact on signaling pathways in response to hypoxia. In addition, extracellular vesicles (EVs) of mesenchymal stromal cells (MSCs) are known to support tissue regeneration after ischemic injuries and are potential vehicles for the delivery of microRNAs. In this study, we aimed to investigate whether overexpression of miR-135b or miR-210 in MSCs can produce EVs enriched with these miRNAs and improve their angiogenic activity. For this purpose, bone marrow MSCs from Balb/C mice were transduced with a lentiviral vector containing a gene expression cassette for miR-135b or miR- 210, and expression profiles of 20 genes and 12 angiogenic microRNAs were evaluated by RT-qPCR. EVs from MSCs were isolated and purified by ultracentrifugation and characterized by flow cytometry and NTA (Nanoparticle Tracking Analyzer). The concentrations of 12 angiogenic microRNAs in EVs were measured by RT-qPCR and these EVs were used to assess pro-angiogenic activity on HUVECs. As result, we observed that the modification of MSCs with miR-210 or miR-135b promoted overexpression of respective microRNAs. The MSCs overexpressing miR-135b presented an upregulation of miR-210-5p and follistatin, a glycoprotein associated with angiogenesis and vasculogenesis. MSCs overexpressing miR-210 led to negative regulation of miR-221 and increase of miR-296. Moreover, EVs derived from the modified MSCs were enriched with both target miRNAs and promoted further formation of tubular structures in HUVEC. Collectively, our results reveal that EVs can be enriched with a specific angiomiR by modifying of MSCs with a lentiviral vector, and these EVs showed increased angiogenic activities, indicating an interesting strategy for EV-based therapy for ischemic diseases.
Keywords Vesículas Extracelulares
MicroRNA
Células Estromais Mesenquimais
Moduladores da Angiogênese.
Extracellular Vesicles
Mesenchymal Stromal Cells
Angiogenesis
MSC
xmlui.dri2xhtml.METS-1.0.item-coverage São Paulo
Language Portuguese
Sponsor Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Grant number processo nº 2018/21072-3
Date 2020
Published in VIEIRA, Juliana Maíra Freitas. Efeito do miR-135b e miR-210 em células estromais mesenquimais na produção de vesículas extracelulares com fatores angiogênicos. São Paulo, 2020. 112 p. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas: Biologia Molecular). Universidade Federal de São Paulo, Escola Paulista de Medicina, São Paulo, 2020.
Research area Terapia gênica e celular de isquemia de membros
Knowledge area Biologia molecular e celular
Publisher Universidade Federal de São Paulo
Extent XXI, 112 p.
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/61324

Show full item record




File

Name: Dissertação M ... s Vieira_ Versão Final.pdf
Size: 3.088Mb
Format: PDF
Description: Masters Thesis
Open file

This item appears in the following Collection(s)

Search


Browse

Statistics

My Account