Avaliação histológica e funcional da ampliação vesical com "scaffold" biológico e sintético com e sem semeadura de células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo. Estudo experimental em coelhos.
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Data
2019-11-26
Autores
Franca, Wagner Aparecido [UNIFESP]
Orientadores
Almeida, Fernando Goncalves De [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Resumo
Objective: Evaluate the histological and functional parameters of bladder enlargement in rabbits with the use of extracellular matrix scaffold and synthetic polyglycolic acid (PGA) scaffold, with and without fat-derived stem cell seeding. Methods: Experimental study which presents 5 groups of nine rabbits: control, extracellular matrix scaffold bladder enlargement with fat-derived stem cell seeding, extracellular matrix scaffold bladder enlargement without stem cell seeding, scaffold bladder enlargement with polyglycolic acid and stem cell seeding and finally group of scaffold bladder enlargement of polyglycolic acid without stem cell seeding. Bladder function was evaluated by analysis of maximal cystometric capacity and bladder capacity in detrusor pressure of 40 cmH20, by urodynamic study and histology, both on the fourth, eighth and twelfth week. Histological analysis was performed with hematoxylin and eosin (H&E) staining to verify the inflammatory reaction (rejection) with the counting of polymorphonuclear cells, lymphocytes, macrophages and foreign body giant cell. Masson's trichrome staining was used to verify the formation of fibrosis through the collagen area. The stem cell used was derived from fat collected from the inguinal region of the rabbit and grown in culture medium. Results: Significant changes in the eighth and twelfth week, (p = 0.032) and (p = 0.033), respectively, in polymorphonuclear cells, foreign body giant cells, macrophages and lymphocytes did not show a rejection-like inflammatory reaction that can occur in clinical transplantation, although they are increased. Collagen analysis showed no statistical difference in the studied groups, the fibrosis areas were equal to the control group. In the functional analysis of variance of pre-cystoplasty and post-cystoplasty bladder compliance, between groups, there were significant increases in the scaffold and PGA groups both seeded with mesenchymal stem cell, demonstrating that the technique allows the improvement of bladder capacity in detrusor pressure of 40 cmH20 (p = 0.049 and p = 0.013, respectively). Cystometric capacity showed no significant increase but showed a tendency to increase in the PGA group seeded with stem cell. Conclusions: Bladder enlargement techniques with implantation of extracellular matrix and PGA scaffolds, seeded or not seeded with fat-derived mesenchymal stem cell, did not generate a deleterious inflammatory reaction, called rejection, and increased bladder capacity in detrusor pressure 40 cmH20. The use of stem cells decreases inflammatory reaction in the enlarged bladder with scaffolds.
Objetivo: Avaliar os parâmetros histológicos e funcionais da ampliação vesical em coelhos com “scaffold” de matriz extracelular e de “scaffold” sintético de ácido poliglicólico, com e sem semeadura de célula tronco mesenquimal derivada de tecido adiposo. Métodos: Estudo experimental com 5 grupos de nove coelhos, grupos controle, ampliação vesical com “scaffold” de matriz extracelular com semeadura de células tronco derivada de tecido adiposo, ampliação vesical com “scaffold” de matriz extracelular sem semeadura de células tronco, ampliação vesical com “scaffold” de ácido poliglicólico com semeadura de células tronco e por fim grupo de ampliação vesical com “scaffold” de ácido poliglicólico sem semeadura de células tronco. Foram avaliados na fase cistométrica, do estudo urodinâmico, a capacidade cistométrica máxima e o volume vesical onde é atingido a pressão detrusora de 40 cmH20. A análise histológica, realizada na quarta, oitava e décima segunda semana foi feita com a coloração hematoxilina e eosina (H&E), para verificar a reação inflamatória local, através da contagem dos polimorfonucleares, linfócitos, macrófagos e célula gigante de corpo estranho. A coloração de Tricômio de Masson foi utilizada para verificar a área de colágeno. A célula tronco utilizada foi derivada de tecido adiposo, coletada da região inguinal do coelho e cultivada no nosso laboratório. Resultados: Na análise de polimorfonucleares houve alterações significantes na oitava e décima segunda semana, (p=0,032) e (p=0,033), respectivamente, na avaliação dos linfócitos houve alterações significante na quarta, (p= 0,040), oitava, (p=0,025) e décima segunda semana (p=0,026). Na análise de macrófagos houve alterações significantes na quarta semana, (p=0,033) e oitava semana, (p=0,034), na análise de célula gigante de corpo estranho, somente na décima segunda semana houve alteração significante, (p=0,015). A análise de colágeno não demonstrou diferença estatística nos grupos estudados, as áreas de fibrose foram iguais ao grupo controle. Na análise funcional, o VPdet 40, pré cistoplastia e pós cistoplastia, entre os grupos, ocorreram aumentos significantes nos grupos “scaffold” de matriz extracelular e de PGA ambos semeados com célula tronco mesenquimal, demonstrando que a técnica permite a melhora da função vesical (p=0,049 e p=0,013, respectivamente). Não houve aumento significante na capacidade cistométrica máxima, contudo verificou-se uma tendência de aumento no grupo PGA semeado com célula tronco. Conclusões: As técnicas de ampliação vesical com implante de “scaffolds” de matriz extracelular e PGA, semeados ou não semeados com célula tronco mesenquimal derivado de tecido adiposo, não geraram reação inflamatória deletéria, denominada rejeição e houve aumento da complacência vesical,com a manutenção da capacidade cistométrica. O uso de célula tronco diminui reação inflamatória na bexiga ampliada com “scaffolds”.
Objetivo: Avaliar os parâmetros histológicos e funcionais da ampliação vesical em coelhos com “scaffold” de matriz extracelular e de “scaffold” sintético de ácido poliglicólico, com e sem semeadura de célula tronco mesenquimal derivada de tecido adiposo. Métodos: Estudo experimental com 5 grupos de nove coelhos, grupos controle, ampliação vesical com “scaffold” de matriz extracelular com semeadura de células tronco derivada de tecido adiposo, ampliação vesical com “scaffold” de matriz extracelular sem semeadura de células tronco, ampliação vesical com “scaffold” de ácido poliglicólico com semeadura de células tronco e por fim grupo de ampliação vesical com “scaffold” de ácido poliglicólico sem semeadura de células tronco. Foram avaliados na fase cistométrica, do estudo urodinâmico, a capacidade cistométrica máxima e o volume vesical onde é atingido a pressão detrusora de 40 cmH20. A análise histológica, realizada na quarta, oitava e décima segunda semana foi feita com a coloração hematoxilina e eosina (H&E), para verificar a reação inflamatória local, através da contagem dos polimorfonucleares, linfócitos, macrófagos e célula gigante de corpo estranho. A coloração de Tricômio de Masson foi utilizada para verificar a área de colágeno. A célula tronco utilizada foi derivada de tecido adiposo, coletada da região inguinal do coelho e cultivada no nosso laboratório. Resultados: Na análise de polimorfonucleares houve alterações significantes na oitava e décima segunda semana, (p=0,032) e (p=0,033), respectivamente, na avaliação dos linfócitos houve alterações significante na quarta, (p= 0,040), oitava, (p=0,025) e décima segunda semana (p=0,026). Na análise de macrófagos houve alterações significantes na quarta semana, (p=0,033) e oitava semana, (p=0,034), na análise de célula gigante de corpo estranho, somente na décima segunda semana houve alteração significante, (p=0,015). A análise de colágeno não demonstrou diferença estatística nos grupos estudados, as áreas de fibrose foram iguais ao grupo controle. Na análise funcional, o VPdet 40, pré cistoplastia e pós cistoplastia, entre os grupos, ocorreram aumentos significantes nos grupos “scaffold” de matriz extracelular e de PGA ambos semeados com célula tronco mesenquimal, demonstrando que a técnica permite a melhora da função vesical (p=0,049 e p=0,013, respectivamente). Não houve aumento significante na capacidade cistométrica máxima, contudo verificou-se uma tendência de aumento no grupo PGA semeado com célula tronco. Conclusões: As técnicas de ampliação vesical com implante de “scaffolds” de matriz extracelular e PGA, semeados ou não semeados com célula tronco mesenquimal derivado de tecido adiposo, não geraram reação inflamatória deletéria, denominada rejeição e houve aumento da complacência vesical,com a manutenção da capacidade cistométrica. O uso de célula tronco diminui reação inflamatória na bexiga ampliada com “scaffolds”.