Viabilidade e morte celular em queimaduras In vitro

Nenhuma Miniatura disponível
Data
2018-03-30
Autores
Fernandes, Ana Carolina Morais [UNIFESP]
Orientadores
Ferreira, Lydia Masako [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Introduction: Burns are responsible for pathophysiological, cellular and molecular changes and represent a severe form of trauma. There are few in vitro studies that allow the analysis of viability and cell death in thermal burns. Objective: To develop an experimental in vitro burn model capable of evaluating the activity of skin cells such as NIH-3T3 fibroblast line cells under thermal stress conditions for specific temperature values. Characterizing the cellular morphology and the process of cell death by necrosis and / or apoptosis associated with thermal burn, impossible to be evaluated for skin cells in vivo. Methods: 1) NIH-3T3 fibroblast line cells were used, which were subjected to thermal burn for 30s at specified temperatures; 2) The effects of thermal injury on cell viability were determined by: MTT assay, flow cytometry and immunohistochemistry; 3) statistical analysis was performed by the ANOVA variance test, for p <0.05, considering the mean and standard error of quadriplicates, n=4. Results: the MTT assay determined two graphical curves (two phases) with an inflection point for the delta temperature of 15 ° C; flow cytometric analysis indicated that with the increase of the delta temperature there was progressively increase in apoptosis followed by progressive increase in necrosis; the immunohistochemistry evidenced that with the increase in temperature there was a decrease in number of cells and number of mitosis, changes in membrane structure and cytoskeleton (formation of vesicles), with pycnotic and irregular nuclei. Conclusion: With the increase of thermal injury temperature there were significant changes in cellular activity and viability; drastic changes in morphology, with cellular lysis and progressive increase of apoptosis and necrosis of NIH 3T3 cells.
Queimaduras são responsáveis por alterações fisiopatológicas, celulares e moleculares e representam formas graves de trauma. Poucos são os estudos in vitro que possibilitem a análise da viabilidade e morte celular em queimaduras térmicas. Métodos: 1) Foram utilizadas células de linhagem de fibroblastos NIH-3T3, que foram submetidas a queimadura térmica por 30s a temperaturas especificadas; 2) Os efeitos da lesão térmica sobre a viabilidade celular foram determinados por ensaio MTT, citometria de fluxo e imunohistoquímica; 3) a análise estatística foi realizada pelo teste de variância ANOVA, para p<0.05, considerando a média e erro padrão de quadriplicatas, n=4. Resultados: o ensaio MTT determinou duas curvas gráficas (duas fases) com um ponto de inflexão para a temperatura delta de 15ºC. A análise por Citometria de Fluxo indicou que com o aumento do delta de temperatura houve progressivamente aumento de apoptose seguido pelo aumento progressivo de necrose. A Imunohistoquímica evidenciou que com o aumento da temperatura houve diminuição de número de células e do número de mitoses, mudanças na estrutura da membrana e citoesqueleto (formação de vesículas), com núcleos picnóticos e irregulares. Conclusão: Com o aumento da temperatura de lesão térmica houveram mudanças significativas na atividade celular e viabilidade (mudanças drásticas na morfologia, com lise celular e aumento progressivo de apoptose e necrose das células NIH 3T3).
Descrição
Citação