Deficiênciade coenzima Q10: caracterização clínica, bioquímica e molecular
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Data
2018-11-29
Autores
Miyadahira, Juliana Harumi Arita [UNIFESP]
Orientadores
Barsottini, Orlando Graziani Povoas [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Objective: to identify patients with suspected coenzyme Q10 deficiency (CoQ10) and
make a clinical, biochemical and molecular characterization of these patients.
Methods: twenty seven patients between 0 and 17 years old from Child Neurology
and General Neurology and Ataxias clinics of Universidade Federal de São Paulo,
with clinical suspicion of CoQ10 deficiency were selected and evaluated by our group
of neurologists. They were submitted to preestablished
complementary exams and
classified according to one of the classic CoQ10 deficiency phenotypes. Biochemical
studies (CoQ10 content, mitochondrial complexes, oxidative stress measurements,
citrate synthase dosage, glutathione peroxidase activity and mitochondrial DNA
quantification) were performed on skin fibroblasts. Total CoQ10 skin fibroblasts was
measured by HPLC / ECD. Mitochondrial complexes, citrate synthase activities and
glutathione peroxidase were measured by spectrophotometry. Oxidative stress was
measured by cell marking of superoxide anions with MitoSOX kit. Quantification of
mitochondrial DNA was obtained by normalizing its quantity by the single copy of the
B2M gene. Molecular analyzes by exome sequencing were performed in those with
low CoQ10 levels compared to controls or with suggestive biochemical profile.
Statistical analysis was applied to the biochemical tests using oneway
ANOVA
followed by Bonferroni adjustment for multiple comparisons, considering p <0.05.
Results: five out of twenty seven patients had CoQ10 deficiency. Patients with
CoQ10 deficiency presented variable activities of mitochondrial complexes. Citrate
synthase activity was increased to 3 of them. The generation of superoxide anions
was increased to 2 patients suggesting mitochondrial dysfunction. Molecular analysis
could identify secondary CoQ10 deficiencies.
Objetivo: identificar pacientes com suspeita de deficiência de coenzima Q10 (CoQ10) e fazer uma caracterização clínica, bioquímica e molecular destes. Métodos: Vinte e sete pacientes entre 0 e 17 anos dos ambulatórios de Neurologia Infantil e Neurologia Geral e Ataxias da Universidade Federal de São Paulo, com suspeita clínica de deficiência de CoQ10 foram selecionados e avaliados pelo nosso grupo de neurologistas. Foram submetidos a exames complementares préestabelecidos e classificados de acordo com um dos fenótipos de deficiência de CoQ10 já descritos na literatura. Estudos bioquímicos (conteúdo de CoQ10, dosagem dos complexos mitocondriais, medidas do estresse oxidativo, dosagem de citrato sintase, atividade da glutationa peroxidase e quantificação do DNA mitocondrial) foram realizados em fibroblastos da pele. A CoQ10 total dos fibroblastos da pele foi medido por HPLC / ECD. A dosagem de complexos mitocondriais, atividades de citrato sintase e glutationa peroxidase foram medidas por espectrofotometria. O estresse oxidativo foi medido através da marcação celular de ânions superóxidos com o kit MitoSOX. A quantificação do DNA mitocondrial foi obtida através da normalização da sua quantidade pela cópia única do gene B2M. As análises moleculares por sequenciamento do exoma foram realizadas naqueles que apresentaram níveis baixos em relação aos controles ou com perfil bioquímico sugestivo. A análise estatística foi aplicada para os ensaios bioquímicos utilizandose ANOVA de sentido único seguido de ajuste de Bonferroni para comparações múltiplas, considerando p<0,05. Resultados: Cinco entre vinte e sete pacientes apresentaram deficiência de CoQ10. Os pacientes com deficiência de CoQ10 apresentaram atividades variáveis de complexos mitocondriais. A atividade da citrato sintase foi aumentada para 3 deles. A geração de ânions superóxido foi aumentada para 2 pacientes, sugerindo disfunção mitocondrial. A análise molecular identificou deficiências secundárias de coenzima Q10.
Objetivo: identificar pacientes com suspeita de deficiência de coenzima Q10 (CoQ10) e fazer uma caracterização clínica, bioquímica e molecular destes. Métodos: Vinte e sete pacientes entre 0 e 17 anos dos ambulatórios de Neurologia Infantil e Neurologia Geral e Ataxias da Universidade Federal de São Paulo, com suspeita clínica de deficiência de CoQ10 foram selecionados e avaliados pelo nosso grupo de neurologistas. Foram submetidos a exames complementares préestabelecidos e classificados de acordo com um dos fenótipos de deficiência de CoQ10 já descritos na literatura. Estudos bioquímicos (conteúdo de CoQ10, dosagem dos complexos mitocondriais, medidas do estresse oxidativo, dosagem de citrato sintase, atividade da glutationa peroxidase e quantificação do DNA mitocondrial) foram realizados em fibroblastos da pele. A CoQ10 total dos fibroblastos da pele foi medido por HPLC / ECD. A dosagem de complexos mitocondriais, atividades de citrato sintase e glutationa peroxidase foram medidas por espectrofotometria. O estresse oxidativo foi medido através da marcação celular de ânions superóxidos com o kit MitoSOX. A quantificação do DNA mitocondrial foi obtida através da normalização da sua quantidade pela cópia única do gene B2M. As análises moleculares por sequenciamento do exoma foram realizadas naqueles que apresentaram níveis baixos em relação aos controles ou com perfil bioquímico sugestivo. A análise estatística foi aplicada para os ensaios bioquímicos utilizandose ANOVA de sentido único seguido de ajuste de Bonferroni para comparações múltiplas, considerando p<0,05. Resultados: Cinco entre vinte e sete pacientes apresentaram deficiência de CoQ10. Os pacientes com deficiência de CoQ10 apresentaram atividades variáveis de complexos mitocondriais. A atividade da citrato sintase foi aumentada para 3 deles. A geração de ânions superóxido foi aumentada para 2 pacientes, sugerindo disfunção mitocondrial. A análise molecular identificou deficiências secundárias de coenzima Q10.