Estudo da reparação do nervo facial de ratos por células-tronco mesenquimais de polpa dental de dente decíduo exfoliado humano
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Data
2017-05-26
Autores
Saez, Daniel Martinez [UNIFESP]
Orientadores
Silva, Marcelo Cavenaghi Pereira da [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Resumo
To evaluate the regeneration of the facial nerve of rats, after lesion by compression and application of mesenchymal stem cells obtained from the dental pulp of human exfoliated deciduous teeth (SHED). Methods: The study was conducted on 70 male Wistar rats divided into two study groups: Group I – lesion by compression (positive control); Group II – lesion by compression and SHED, and distributed into study periods of 03, 07, 14, 21 and 42 days postoperative. The right side of the face, without lesion composed the Naive Group – a negative control. After surgery for lesion by compression of the facial nerve trunk, group II received application of a culture medium associated with SHED (5x105 cells in 4 μL of DMEM). In the study periods, video recordings were obtained from the animals using a digital camera and the videos were analyzed by three examiners, who assessed the functional recovery of the facial nerve by the behavioral method for whisker movement using an arbitrary score. After euthanasia, the trunk and buccal branch of the facial nerve were removed, identified and processed for transmission electron microscope and Immunoblotting assay. All results were submitted to statistical tests and considered significant if p<0.05. Results: The behavioral method for whisker movement revealed that group II has complete functional recovery of vibrissae at 14 days, while group I presented recovery after six weeks. By transmission electron microscope, histometric analysis of the facial nerve trunk did not reveal statistical difference for the number of myelinated fibers between groups. Concerning the thickness of myelin sheath, group I exhibited statistically higher values compared to group II, which presented statistically higher values for the outer and inner perimeters and g-ratio compared to group I. With regard to the buccal branch of the facial nerve, no statistical difference was observed for all parameters between groups. Qualitative analysis revealed that the facial nerve trunk in group II presented histological improvement compared to animals in group I, specifically at 07 days, evidencing predominance of non-myelinated fibers and few degenerating axons, which revealed structural disorganization of myelin sheath lamellae (100,000X magnification) and at 14 days, evidencing better axonal and structural organization of the myelin sheath. The buccal branch did not reveal difference between groups. At treatment completion, the trunk and buccal branch of the facial nerve presented greater number of myelinated fibers, with similar morphology, and the myelin sheaths were thick and structurally organized in all groups. Concerning the levels of NGF (nerve growth factor) expression, group II exhibited statistically greater values (p<0.05) compared to the Naive Group at 07 days and, at 6 weeks after treatment, groups I and II were close to the levels observed for the naïve group. Conclusion: the utilization of SHED promoted better and earlier functional and histological recovery in regeneration of the facial nerve trunk of Wistar rats with a single application two weeks after treatment.
Avaliar a regeneração do nervo facial de ratos, após lesão por compressão e aplicação de células-tronco mesenquimais obtidas de polpa dental de dentes decíduos exfoliados humanos (SHED). Métodos: Utilizou-se 70 ratos machos Wistar distribuídos em dois grupos de estudo: Grupo I – lesão por compressão (controle positivo); Grupo II – lesão por compressão e SHED e distribuídos nos tempos de estudo de 03, 07, 14, 21 e 42 dias pós-operatórios. A hemiface direita, constituiu o Grupo Naive – nervo facial íntegro, como controle negativo. Após a cirurgia para lesão por compressão do tronco do nervo facial, o grupo II recebeu a aplicação de meio de cultura associado a SHED (5x105 células em 4 μL de DMEM). Nos tempos do estudo, os animais foram filmados por câmera digital, e os vídeos, analisados por três examinadores, que analisaram a recuperação funcional do nervo facial, por meio da observação do movimento de vibrissas usando uma escala arbitrária. Após eutanásia, o tronco e ramo bucal do nervo facial foram removidos, identificados e processados para Microscopia Eletrônica de Transmissão e Ensaios de Immunoblotting. Os resultados foram submetidos a testes estatísticos e considerados significativos os valores de p<0.05. Resultados: O método comportamental de movimento das vibrissas revelou que o grupo II teve recuperação funcional completa das vibrissas no tempo de 14 dias, enquanto o grupo I apresentou recuperação após seis semanas. Na análise histológica quantitativa do tronco do nervo facial não apresentou diferença estatística para o número de fibras mielinizadas entre os grupos. Para a espessura da bainha de mielina o grupo I mostrou valores estatisticamente superiores quando comparado ao grupo II, que apresentou valores estatisticamente superiores para os perímetros externo, interno e razão G quando comparado ao grupo I. Para o ramo bucal do nervo facial não foi observada diferença estatística para todos os parâmetros entre os grupos. Na análise histológica qualitativa, observou-se que o tronco do nervo facial do grupo II apresentou melhora histológica em comparação aos animais do grupo I, especificamente, no tempo de 07 dias, sendo observado um predomínio de fibras amielínicas e poucos axônios em degeneração, que revelaram uma desorganização estrutural das lamelas da bainha de mielina (aumento de 100.000X) e no tempo de 14 dias, sendo observado uma melhor organização axonal e estrutural da bainha de mielina. No ramo bucal, não houve diferença entre os grupos. No final do tratamento, o tronco e o ramo bucal do nervo facial apresentaram um maior número de fibras mielinizadas, com aspectos histológicos similares e bainhas de mielina espessas e estruturalmente organizadas, em todos os grupos. Quanto aos níveis de expressão do fator de crescimento neural, o grupo II mostrou valores estatisticamente superiores (p<0.05) quando comparado ao grupo Naive no tempo de 07 dias e, após seis semanas do tratamento, os grupos I e II aproximaram-se dos níveis expressos pelo grupo Naive. Conclusão: A utilização de SHED resultou em recuperações funcionais e histológicas melhores e mais precoces na regeneração do tronco do nervo facial de ratos Wistar com uma única aplicação após duas semanas de tratamento.
Avaliar a regeneração do nervo facial de ratos, após lesão por compressão e aplicação de células-tronco mesenquimais obtidas de polpa dental de dentes decíduos exfoliados humanos (SHED). Métodos: Utilizou-se 70 ratos machos Wistar distribuídos em dois grupos de estudo: Grupo I – lesão por compressão (controle positivo); Grupo II – lesão por compressão e SHED e distribuídos nos tempos de estudo de 03, 07, 14, 21 e 42 dias pós-operatórios. A hemiface direita, constituiu o Grupo Naive – nervo facial íntegro, como controle negativo. Após a cirurgia para lesão por compressão do tronco do nervo facial, o grupo II recebeu a aplicação de meio de cultura associado a SHED (5x105 células em 4 μL de DMEM). Nos tempos do estudo, os animais foram filmados por câmera digital, e os vídeos, analisados por três examinadores, que analisaram a recuperação funcional do nervo facial, por meio da observação do movimento de vibrissas usando uma escala arbitrária. Após eutanásia, o tronco e ramo bucal do nervo facial foram removidos, identificados e processados para Microscopia Eletrônica de Transmissão e Ensaios de Immunoblotting. Os resultados foram submetidos a testes estatísticos e considerados significativos os valores de p<0.05. Resultados: O método comportamental de movimento das vibrissas revelou que o grupo II teve recuperação funcional completa das vibrissas no tempo de 14 dias, enquanto o grupo I apresentou recuperação após seis semanas. Na análise histológica quantitativa do tronco do nervo facial não apresentou diferença estatística para o número de fibras mielinizadas entre os grupos. Para a espessura da bainha de mielina o grupo I mostrou valores estatisticamente superiores quando comparado ao grupo II, que apresentou valores estatisticamente superiores para os perímetros externo, interno e razão G quando comparado ao grupo I. Para o ramo bucal do nervo facial não foi observada diferença estatística para todos os parâmetros entre os grupos. Na análise histológica qualitativa, observou-se que o tronco do nervo facial do grupo II apresentou melhora histológica em comparação aos animais do grupo I, especificamente, no tempo de 07 dias, sendo observado um predomínio de fibras amielínicas e poucos axônios em degeneração, que revelaram uma desorganização estrutural das lamelas da bainha de mielina (aumento de 100.000X) e no tempo de 14 dias, sendo observado uma melhor organização axonal e estrutural da bainha de mielina. No ramo bucal, não houve diferença entre os grupos. No final do tratamento, o tronco e o ramo bucal do nervo facial apresentaram um maior número de fibras mielinizadas, com aspectos histológicos similares e bainhas de mielina espessas e estruturalmente organizadas, em todos os grupos. Quanto aos níveis de expressão do fator de crescimento neural, o grupo II mostrou valores estatisticamente superiores (p<0.05) quando comparado ao grupo Naive no tempo de 07 dias e, após seis semanas do tratamento, os grupos I e II aproximaram-se dos níveis expressos pelo grupo Naive. Conclusão: A utilização de SHED resultou em recuperações funcionais e histológicas melhores e mais precoces na regeneração do tronco do nervo facial de ratos Wistar com uma única aplicação após duas semanas de tratamento.