Atividade Antileucêmica De Compostos Bioativos E Possível Efeito Sinérgico Quando Combinados Aos Inibidores De Tirosina Quinase
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Data
2017-12-20
Autores
Silva, Janaina Peixoto Da [UNIFESP]
Orientadores
Trindade, Claudia Bincoletto [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Objective: To evaluate the antileukemic activity of the bioactive compounds (Cyanidin 3-glucoside, Chlorogenic Acid and Curcumin) in order to perform an initial screening for possible association of these compounds with ITQs (Imatinib and Nilotinib) in K-562 cell line and in CML bone marrow cells. Methods: K-562 cells were evaluated for reactive oxygen species levels, caspase-dependent cell death, BAX and tBID activation, BCR-ABL, p62 and LC3II protein levels, pharmacological modulation of autophagy with Chloroquine and Beclin silencing gene, as well as the study of CD11b and CD15 cells differentiation markers. In addition, the clonogenic capacity of bone marrow cells from CML patients was carried out. Results: Curcumin (25μM) was more cytotoxic for K-562 cells when compared to the other bioactive compounds studied in this work. For this reason it was chosen to proceed with the next experiments. The association of Curcumin (15 uM) with Nilotinib, promoted an increase of cell death with activation of BAX and tBID, in which was reversed in the presence of Z-VAD-FMK, suggesting the involvement of caspase-dependent cell death in K-562. The pharmacological inhibition of autophagy promoted cell death, suggesting that autophagy would be involved as a resistance process after exposure to Curcumin 15μM. These findings were confirmed by Western Blot with detection of LC3II and p62. Reduced of clonogenicity in leukemic cells by Curcumin, as well as by the association Nilotinib+Curcumin was also evidenced in CML cell patients. It is interesting to note that Curcuma longa extract, in which has Curcumin and other curcuminoids in its constitution, presented similar data to Curcumin against K-562 cells. Conclusion: These data suggest that Curcumin and its association with Nilotinib showed significant antileukemic potential. In addition, Curcumin promoted similar actions to those of Nilotinib in the bone marrow cells of CML patients, thus demonstrating its therapeutic potential.
Objetivo: Avaliar a atividade antileucêmica dos compostos bioativos (Cianidina 3-glicosídeo, Ácido Clorogênico e Curcumina) a fim de realizar um screening inicial para possível associação desses aos Inibidores de tirosina quinase (Imatinib e Nilotinib) em linhagem de células K-562 e em células de medula óssea de pacientes com LMC. Métodos: As células K-562 foram avaliadas quanto aos níveis de espécies reativas de oxigênio, morte celular caspase-dependente, ativação de BAX e tBID, níveis proteicos de BCR-ABL, p62 e LC3II, modulação farmacológica da autofagia com Cloroquina e sileciamento do gene Beclina, bem como o estudo de marcadores CD11b e CD15. Além disso, foi realizado o estudo da capacidade clonogênica em células de medula óssea de pacientes com LMC. Resultados: A Curcumina (25µM) foi mais citotóxica para células K-562 quando comparado aos outros compostos bioativos estudados neste trabalho, por essa razão, foi escolhida para seguir com os experimentos. A associação deste composto ao Nilotinib, em baixa concentração (15 uM), promoveu um aumento de morte celular com ativação de BAX e tBID, o qual foi revertido na presença do Z-VAD (inibidor de pan caspase), sugerindo o envolvimento do processo de morte celular caspase-dependente em células K-562. O estudo da participação da autofagia, demonstrou que a inibição farmacológica promoveu morte celular, sugerindo que a autofagia estaria envolvida com o processo de resistência, após a exposição a Curcumina 15µM. Esses achados foram confirmados pelos estudos de Western Blot com deteceção de LC3II e p62. A redução da capacidade clonogência de células leucêmicas pela Curcumina e associação Nilotinib+Curucmina, foi evidenciada nos ensaios clonais com células de pacientes com LMC. Interessante notar que o extrato de Curcuma longa, o qual apresenta a Curcumina e outros curcuminóides em sua constituição, apresentou dados similares a Curcumina quanto ao potentical citotóxico em células K-562. Conclusão: Esses dados sugerem que a Curcumina e a associação deste ao Nilotinib apresentaram potencial antileucêmico significativo. Além disso, a Curcumina promoveu ações similares ao Nilotinib quanto a redução da capacidade clonogênica em células de medula óssea de pacientes, evidenciando assim o seu potencial terapêutico.
Objetivo: Avaliar a atividade antileucêmica dos compostos bioativos (Cianidina 3-glicosídeo, Ácido Clorogênico e Curcumina) a fim de realizar um screening inicial para possível associação desses aos Inibidores de tirosina quinase (Imatinib e Nilotinib) em linhagem de células K-562 e em células de medula óssea de pacientes com LMC. Métodos: As células K-562 foram avaliadas quanto aos níveis de espécies reativas de oxigênio, morte celular caspase-dependente, ativação de BAX e tBID, níveis proteicos de BCR-ABL, p62 e LC3II, modulação farmacológica da autofagia com Cloroquina e sileciamento do gene Beclina, bem como o estudo de marcadores CD11b e CD15. Além disso, foi realizado o estudo da capacidade clonogênica em células de medula óssea de pacientes com LMC. Resultados: A Curcumina (25µM) foi mais citotóxica para células K-562 quando comparado aos outros compostos bioativos estudados neste trabalho, por essa razão, foi escolhida para seguir com os experimentos. A associação deste composto ao Nilotinib, em baixa concentração (15 uM), promoveu um aumento de morte celular com ativação de BAX e tBID, o qual foi revertido na presença do Z-VAD (inibidor de pan caspase), sugerindo o envolvimento do processo de morte celular caspase-dependente em células K-562. O estudo da participação da autofagia, demonstrou que a inibição farmacológica promoveu morte celular, sugerindo que a autofagia estaria envolvida com o processo de resistência, após a exposição a Curcumina 15µM. Esses achados foram confirmados pelos estudos de Western Blot com deteceção de LC3II e p62. A redução da capacidade clonogência de células leucêmicas pela Curcumina e associação Nilotinib+Curucmina, foi evidenciada nos ensaios clonais com células de pacientes com LMC. Interessante notar que o extrato de Curcuma longa, o qual apresenta a Curcumina e outros curcuminóides em sua constituição, apresentou dados similares a Curcumina quanto ao potentical citotóxico em células K-562. Conclusão: Esses dados sugerem que a Curcumina e a associação deste ao Nilotinib apresentaram potencial antileucêmico significativo. Além disso, a Curcumina promoveu ações similares ao Nilotinib quanto a redução da capacidade clonogênica em células de medula óssea de pacientes, evidenciando assim o seu potencial terapêutico.