Eficácia da interleucina-12 (il-12) no tratamento adjuvante da tricosporonose murina experimental e caracterização in vitro de fatores associados à virulência em trichosporon spp

Abstract

Trichosporon yeasts have been associated with invasive and severe opportunistic infections in immunocompromised patients. In spite of recent scientific and technological advances, are still frequent reports of treatment failure and mortality rates are quite high. The concern of the scientific community with the patient of the new century stimulated the search for more effective methods of diagnosis and new therapeutic regimens. The objective of this research was to evaluate the efficacy of interleukin -12 as an adjuvant of voriconazole in the treatment of experimental murine trichosporonosis; verify the sensitivity to antifungal agents by comparing the E-test™ with the microdilution method, to investigate the influence that the incubation temperature over the expression of proteasis , phospholipasis , lipasis and DNasis in Trichosporon species through the use of specific substrates , following the classical recommendations in the literature and characterize the production of polymers compatible with melanin in the cell wall of Trichosporon spp. by growing isolates on media with different sources of diphenols . The use of IL -12 in the adjuvant treatment of experimental murine trichosporonosis highest efficiency in controlling the growth of the fungus and minimized general clinical signs of BALB/c mice immunosuppressed and inoculated with standard strain of T. asahii (CBS 2479). We conclude that IL - 12 is an effective alternative for the treatment of trichosporonosis and future studies will evaluate its use in humans. Elevated MICs for fluconazole were observed in sensitivity tests with eminent discriminatory capacity of the E-test™ in identifying isolates with resistance trend. Comparative tests for MICs presented by E-test™ and microdilution indicated a low correlation between the methods. Lipases were the main enzymes produced by Trichosporon spp. and its activity showed enhanced at 25 °C, although all enzymes studied have been detected , albeit at varying intensities. Although the enzymatic expression was variable among species, the temperature has significant influence on the activity of lipases, phospholipasis and proteinasis in yeast of the genus Trichosporon. Studies that characterize the actual role of these enzymes in the pathogenesis of trichosporonosis are still needed. T. mucoides specimens demonstrated capability to express eletrondensos particularly compatible with the polymers of melanin in the cell wall. Trichosporon yeasts are capable of expressing melanin-like polymers eletrondensos difenólicas when stimulated by different sources, however, this ability should be better characterized in different species.

Leveduras do gênero Trichosporon têm sido associadas a infecções oportunísticas invasivas e graves em pacientes imunocomprometidos. A pesar dos recentes avanços científicos e tecnológicos, ainda são frequentes os relatos de insucesso no tratamento e os índices de mortalidade são bastante elevados. A preocupação da comunidade científica com o paciente do novo século estimulou a busca por métodos diagnósticos mais eficazes e por novos regimes terapêuticos. O objetivo da presente investigação foi avaliar a eficácia da interleucina-12 como coadjuvante do voriconazol no tratamento da tricosporonose murina experimental; verificar o perfil de sensibilidade aos antifúngicos através da comparação do E-test® com o método da microdiluição, investigar a influência que a temperatura de incubação exerce sobre a expressão de proteinases, fosfolipases, lipases e DNAses em espécies de Trichosporon através do emprego de substratos específicos, seguindo as recomendações clássicas da literatura e caracterizar a produção de polímeros compatíveis com a melanina na parede celular de Trichosporon spp. através do cultivo de isolados em meios com diferentes fontes de difenóis. O emprego da IL-12 no tratamento adjuvante da tricosporonose murina experimental apresentou maior eficiência no controle da multiplicação do fungo e minimizou sinais clínicos gerais dos camundongos BALB/c imunossuprimidos e inoculados com cepa-padrão de T. asahii (CBS 2479). Concluímos que a IL-12 constitui uma alternativa eficaz para o tratamento da tricosporonose e futuros estudos permitirão avaliar seu emprego em seres humanos. CIMs elevadas para fluconazol foram observadas nos testes de sensibilidade, com eminente capacidade discriminatória do E-test® em identificar isolados com tendência à resistência. Os testes comparativos para as CIMs apresentadas por E-test® e microdiluição indicaram uma baixa correlação entre os métodos. As lipases foram as principais enzimas produzidas por Trichosporon spp. e sua atividade se mostrou potencializada a 25ºC, embora todas as enzimas pesquisadas tenham sido detectadas, ainda que em intensidades variáveis. Embora a expressão enzimática tenha sido variável entre as espécies, a temperatura exerce influência significativa sobre a atividade de lipases, fosfolipases e proteinases em leveduras do gênero Trichosporon, estudos que caracterizem o papel real dessas enzimas na patogênese da tricosporonose ainda são necessários. Amostras de T. mucoides demonstraram particular capacidade em expressar polímeros eletrondensos compatíveis com os de melanina, na parede celular. Leveduras do gênero Trichosporon são capazes de expressar polímeros eletrondensos semelhantes à melanina quando estimuladas por diferentes fontes difenólicas, contudo, essa capacidade deve ser mais bem caracterizada nas diferentes espécies.