Protocolo de estudo para a utilização da técnica seldi tof ms (surface-enhanced laser desorption/ionizatio time-of-flight mass spectrometry), no rastreamento de biomarcadores circulantes no sangue de doadores de órgãos para transplante de pâncreas

Abstract

Introduction: pancreas-kidney simultaneous transplantation is the only capable method to maintaining an euglycemia prolonged state in a type 1 diabetic patients who attend with renal failure. However, this procedure is associated with a high mortality rate due to postoperative complications and early loss of pancreatic and kidney grafts. The main cause of pancreatic graft failure, is the consequent loss cause technical dysfunction, suffering and graft thrombosis, commonly associated with clinical and biological characteristics of organ donors, as well as cellular acute rejection. By the time, donor organs criteria for selection is based on age, the serum sodium value, vasoactive drugs use and the hemodynamic changes during the capture, also the serum creatinine levels, is used to assessment of renal function. These changes characteristics are well known, that related the quality of grafts for transplantation and probably reflect a systemic metabolic and protein profile of the donor at the time of supply the organs for transplants, which has not yet been determined or associated with functioning grafts . Objectives: To present a study protocol identyfing systemic proteomic profiles of organ donors, relating it to the clinical criteria and comparing this profile to the clinical outcome of recipients of these grafts. Methods: 31 different donors, blood samples of different organs were analyzed in the state of São Paulo, subjecting them to proteomic analysis using the technique SELDI-TOF-MS (Surface Enhanced Laser Desorption-/ Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry), evaluating 41 different analytes (cytokines and chemokines) standardized by HCYTOMAG KIT-60K-PX29 / PX30-HCYTMAG-60K / 60K-HCYTMAG-PX38 / PX41 HCYTMAG-60K-Milliplex®, determining in this way these donors profile, tabulating this information later to establish a large-scale 48 comparison of these profiles, with clinical data from donors and recipients and the evolution of the respective organs. Results: The IL4, IL10, IL 13, IL 1b, IL 9, IL 2 and TNF ?, showed very low doses of all 31 samples. Interleukins SDC40L, eotaxin, IP 10, MCP 1, RANTES, MDC, and IL 6, unlike the previous ones, were very high in all samples. Conclusions: This study showed that it was possible to establish a proteomic profile of donor organs that can lead to a comparative analysis with the clinical data of donors and the results of the receptors, indicating a new prevention line against adverse events, mostly related to rejection and the survival of grafts and recipients.

O transplante simultâneo pâncreas-rim é o único método capaz de manter um estado prolongado de euglicemia nos doentes diabéticos tipo 1 que cursam com insuficiência renal. No entanto, este procedimento está associado a uma alta taxa de mortalidade devido às complicações pós-operatórias e à perda precoce dos enxertos pancreáticos e renais. A principal causa de falência os enxertos pancreáticos é a perda técnica consequente à disfunção, ao sofrimento e à trombose do enxerto, comumente associadas às características clínicas e biológicas dos doadores de órgãos, bem como rejeição celular aguda. Até o momento são utilizados critérios para escolha dos doadores de órgãos baseados na iadade, no valor do sódio sérico, no uso de drogas vasoativas, nas alterações hemodinâmicas no momento da captação e na avaliação da função renal através dos níveis de creatinina sérica. Estas características bem conhecidas são alterações que estão relacionadas à qualidade dos enxertos para transplante e, provavelmente, refletem um perfil metabólico e proteico sistêmico dos doadores, no momento da oferta de órgãos para transplantes, que ainda não foi determinado ou associado com o funcionamento dos enxertos. Objetivos: Apresentar um protocolo de estudo para identificar perfis proteômicos sistêmicos dos doadores de órgãos, relacionando-o com os critérios clínicos e comparando este perfil à evolução clínica dos receptores destes enxertos. Métodos: Foram analisadas 31 amostras de sangue de diferentes doadores de órgãos diferentes, no estado de São Paulo, submetendo-as às análises proteômica, através da técnica SELDI-TOF-MS (Surface-Enhanced Laser Desorption/Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry), avaliando 41 analitos diferentes (citocinas e quimiocinas) padronizados pelo KIT HCYTOMAG-60K-PX29/HCYTMAG-60K- xii PX30/HCYTMAG-60K-PX38/HCYTMAG-60K-PX41 Milliplex?, determinando, dessa maneira, o perfil desses doadores, tabulando essas informações, para posteriormente estabelecer em larga escala uma comparação desses perfis com os dados clínicos dos doadores e com a evolução dos receptores dos respectivos órgãos. Resultados: Nota-se que a IL4, IL10, IL 13, IL 1b, IL 9, IL 2 e TNF ?, apresentaram dosagens muito baixas em todas as 31 amostras. As Interleucinas SDC40L, EOTAXINA, IP 10, MCP 1, RANTES, IL 6 e MDC, ao contrário das anteriores, estiveram muito elevadas em todas as amostras. Conclusões: este estudo mostrou que foi possível estabelecer um perfil proteômico dos doadores de órgãos que poderá contribuir para uma análise comparativa com os dados clínicos dos doadores e com os resultados dos receptores, indicando uma nova linha de prevenção de eventos adversos, principalmente relacionados a rejeição e a sobrevida dos enxertos e dos receptores.