Efeitos bioquímicos e farmacológicos da fosforilação de componentes do sistema calicreínas-cininas

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Data
2015-11-25
Autores
Assis, Diego Magno [UNIFESP]
Orientadores
Juliano, Maria Aparecida Juliano [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Phosphorylated kininogen and some of its fragments containing serine phosphorylated bradykinin ([pS6]-Bk) were found in human serum and plasma by phosphoproteomic approaches. In the present study, we report the kininogenase ability of human tissue and plasma kallikreins and tryptase to generate [pS6]-Bk or Lys-[pS6]-Bk having as substrate the synthetic human kininogen fluorescent fragment Abz-MISLMKRPPGF[pS386]PFRSSRI-NH2. The pharmacological assays of [pS6]-Bk showed it as fuI! B2 bradykinin receptor agonist in smooth muscle, it produces portal liver hypertensive response in rat and mouse paw edema that last longer than Bk. The rat hypotensive responses to infusions of Bk are significantly larger than those of [pS6]Bk, both if injected through femoral vein or carotid artery. [pS6]-Bk was more resistant than Bk to kininase digestions that were performed with angiotensin converting enzyme, neprilysin, thimet oligopeptidase, aminopeptidase P and carboxypeptidase M. NMR experiments indicated that [pS6]-Bk has lower flexibility with pS6- P7 bond restricted to the trans conformation, what can explain [pS6]-Bk more resistance to hydrolysis. In conclusion, [pS6]-Bk is a Bk analogue with longer lasting effects that can be released from human phosphorylated kininogens by the most common kininogenases, and the kininogen phosphorylation state can be a new regulatory control of the kinin systern. vi
o cininogênio humano fosforilado e alguns de seus fragmentos contendo serinas fosforiladas foram encontrados em soro e plasma humano através de investigações de fosfoproteômica. Neste trabalho, nós demonstramos a habilidade das calicreínas plasmática e teciduais assim como da triptase de gerar bradicinina fosforilada ([pS6]-BK) ou Lys-bradicinina fosforilada (Lys-[pS6]-Bk) utilizando um substrato sintético fluorescente Abz- MISLMKRPPGF[pS386]PFRSSRI-NH2o qual representa um fragmento do cininogênio humano. Os ensaios farmacológicos da [pS6]-BK mostraram que ele é um agonista total de receptor B2 em preparações de músculo liso. Também produz uma resposta portal hipertensiva em fígados de rato, causa edema em pata de camundongo e estas duas respostas são prolortqadas em relação à Bk. As respostas hipotensivas de ratos a infusão de Bk são significativamente maiores que a de [pS6]-BK, ambas injectadas ou pela veia femoral ou pela artéria carótida. A [pS6]-Bk fosforilada mostrou-se mais resistentes que Bk em ensaios de digestão pelas cininases utilizando a enzima conversora de angiotensina, rieprilisina, thimet oligopeptidase, aminopeptidase P e carboxipeptidase M. Os experimentos de ressonância magnética nuclear (RMN) indicaram que [pS6]-Bk tem menor flexibilidade sendo a ligação pS6-P7 restrita a uma conformação trans, a qual explica a maior resistência à hidrólise. Como conclusão, a [pS6]-Bk é um análogo de Bk com efeitos mais prolongados e que pode ser liberado de cininogênio humano fosforilado pelos cininogenases comuns. Além disto, a estado de fosforilação do cininogênio pode ser um novo controle regulatório do sistema calicreínas-cininas.
Descrição
Citação
ASSIS, Diego Magno. Efeitos bioquímicos e farmacológicos da fosforilação de componentes do sistema calicreínas-cininas. 2015. 155 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2015.