Estudo da relação estrutura-atividade de fragmentos da leptina
Data
2015-10-28
Autores
Tokuyama, Paula Yumi 
Orientadores
Miranda, Antonio de Miranda
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Leptin is a hormone produced and secreted predominantly from white adipose tissue and plays an important role in the regulation of energy homeostasis. Both it and its receptor OBR (6 isoforms OB-Ra to OB-Rf) share structural and functional similarities with the family I cytokine. The tertiary structure of the molecule is composed of four antiparallel a-hélices. Based on the three dimensional structure, several synthetic peptide fragments of leptin were studied by the group. Taking into account preliminary studies involving the fragment AchLEP89- 98-NH2(Ac-V-L-A-F-S-K-S-S-H-L-NH2) by our group, the fragments were designo The peptides were synthesized rnanually using a protocol for solid-phase by t-Boc strategy, purified by CLAE-FR semi-preparative and characterizes by CLlESI-MS. Resistance to proteolytic degradation assays were performed in BFS and the fragments [D-Leu4]-OB3 and [Ser2, D-Leu4]-OB3 were remained more resistant initially. After amino acids replacement with change the sequence, the fragments Ac-[D-Phe92, D-Lys94, D-Ser95,96]-hLEP89_98-NH2 and Ri-Ac-[D-Phe92, Ser96]-hLEP89-98-NH2(Ri = peptídeo retro-inverso) turned resistant to enzymatic action. To investigate which classes of enzymes that was acting in the degradation, assays were carried out in the presence of inhibitors. It was found that metalloproteases have influence in the degradation of the peptides. Conformational studies by circular dichroism technique not indicated relation between biological activity and structure.
A leptina é um hormônio produzido e secretado principalmente pelo tecido adiposo e é importante na regulação da homeostase energética. Tanto ela como seu receptor OB-R (6 isoformas de OB-Ra a OB-Rf) compartilham semelhanças estruturais e funcionais com a família I das citocinas. A estrutura terciária da molécula é composta por quatro a-hélices antiparalelas. A partir da estrutura tridimensional, diversos fragmentos peptídicos sintéticos da leptina foram estudados pelo grupo. Os fragmentos foram desehhados, partindo de estudos preliminares realizados com o fragmento Ac-hLEPS9-9S-NH2(Ac-V-L-A-F-S-K-S-SH- L-NH2) descrita pelo nosso grupo. Os peptídeos foram sintetizados manualmente pela metodologia da fase sólida empregando-se a estratégia t-Boc. Os compostos foram purificados por RT-CLAE semi-preparativa e caracterizados por CLlESI-MS. Foram realizados ensaios de resistência à degradação proteolítica em BFS e inicialmente, os fragmentos [D-Leu4]-OB3 e [Ser2, D-Leu4]-OB3 foram os mais resistentes à degradação enzimática. Após substituição de aminoácidos sem comprometer a sequência, os fragmentos Ac- [D-Phe92, D-Lys94, D_Ser95,96]-hLEPS9-9S-NH2e Ri-Ac- [D-Phe92, Ser96] - hLEPS9-9S-NH2(Ri = peptídeo retroinverso) tornaram-se resistentes a ação enzimática. A fim de investigar que classes de enzimas estavam atuando na degradação dos peptídeos, ensaios na presença de inibidores foram realizados. Verificou-se que as enzimas pertencentes à classe das metaloproteases influenciam na degradação dos peptídeos. Os estudos conformacionais pela técnica de dicroísmo circular não indicaram relação entre atividade biológica e estrutura.
A leptina é um hormônio produzido e secretado principalmente pelo tecido adiposo e é importante na regulação da homeostase energética. Tanto ela como seu receptor OB-R (6 isoformas de OB-Ra a OB-Rf) compartilham semelhanças estruturais e funcionais com a família I das citocinas. A estrutura terciária da molécula é composta por quatro a-hélices antiparalelas. A partir da estrutura tridimensional, diversos fragmentos peptídicos sintéticos da leptina foram estudados pelo grupo. Os fragmentos foram desehhados, partindo de estudos preliminares realizados com o fragmento Ac-hLEPS9-9S-NH2(Ac-V-L-A-F-S-K-S-SH- L-NH2) descrita pelo nosso grupo. Os peptídeos foram sintetizados manualmente pela metodologia da fase sólida empregando-se a estratégia t-Boc. Os compostos foram purificados por RT-CLAE semi-preparativa e caracterizados por CLlESI-MS. Foram realizados ensaios de resistência à degradação proteolítica em BFS e inicialmente, os fragmentos [D-Leu4]-OB3 e [Ser2, D-Leu4]-OB3 foram os mais resistentes à degradação enzimática. Após substituição de aminoácidos sem comprometer a sequência, os fragmentos Ac- [D-Phe92, D-Lys94, D_Ser95,96]-hLEPS9-9S-NH2e Ri-Ac- [D-Phe92, Ser96] - hLEPS9-9S-NH2(Ri = peptídeo retroinverso) tornaram-se resistentes a ação enzimática. A fim de investigar que classes de enzimas estavam atuando na degradação dos peptídeos, ensaios na presença de inibidores foram realizados. Verificou-se que as enzimas pertencentes à classe das metaloproteases influenciam na degradação dos peptídeos. Os estudos conformacionais pela técnica de dicroísmo circular não indicaram relação entre atividade biológica e estrutura.
Descrição
Citação
TOKUYAMA, Paula Yumi. Estudo da relação estrutura-atividade de fragmentos da leptina. 2015. 96 f. Dissertação (Mestrado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2015.