Análise funcional de antígenos câncer/testículo em linhagens celulares de cabeça e pescoço
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Data
2015-12-17
Autores
Cordaro, Viviane Carlin [UNIFESP]
Orientadores
Oliveira, Andre Luiz Vettore de Oliveira [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the sixth leading cause of cancer worldwide. Approximately one-third of patients present with early-stage disease and these patients are treated with either surgery or radiotherapy, with cure rates of 70-90%. The majority of patients, however, present with locally advanced stage disease. Radical treatment in this situation requires multimodality therapy with surgery, commonly followed by postoperative radiotherapy or chemotherapy. These treatments are intensive and associated with severe acute toxicity and long-term sequelae. Despite recent advances in both surgical and radiotherapy delivery techniques, up to 50% of locally advanced tumours relapse usually within the first 2 years after treatment. The development of novel therapeutic approaches and their integration into the current forms of treatment is of great interest to improve the therapeutic efficacy. Immunotherapy may provide an alternative for current treatment approach. Cancer/testis antigens (CTAs) are family of tumor-associated antigens expressed in human tumors of different histological origin, but not in normal tissues except for testis and placenta. This tumor-restricted pattern of expression, together with their strong in vivo immunogenicity, identified CTA as ideal targets for tumor-specific immunotherapeutic approaches. A screening for CTA expressed in HNSCC detected HORMAD1 and XAGE1 recurrently expressed in these tumors. Objectives: The aim of this study is better understand the role of HORMAD1 and XAGE1 in HNSCC by evaluating its influence in different tumorigenic processes, such as apoptosis, cell cycle, invasion, migration and cell viability. Methods: The expression these CTAs was evaluated in different HNSCC cell lines by RT-PCR. Their expression was silenced by shRNA and assays were conducted to evaluate the impact of these genes absence. Results: The HORMAD1 and XAGE1 expression was silenced in JHU-028 cell line and confirmed by Western Blot assays and qRT-PCR respectively. Functional testing revealed that the absence of HORMAD1 led to a reduction in the proportion of cells in the G1 phase of the cell cycle and increased in S phase, a decrease in capacity of migration and cell invasion and an increase in apoptosis rates and cell proliferation. The silencing of the gene XAGE1 in JHU-028 cell line was significantly associated with reduced cell invasiveness. Conclusions: The results of in vitro assays indicate that HORMAD1 and XAGE1 contribute to the tumorigenesis process of HNSCC.
O Carcinoma Espinocelular de Cabeça e Pescoço (CECP) é a sexta neoplasia mais frequente no mundo. Aproximadamente um terço dos pacientes apresentam-se em estágios iniciais e são tratados com cirurgia ou radioterapia, com taxas de cura de 70-90%. Entretanto, a maioria dos pacientes é diagnosticada com doença em estágio avançado. Essa situação requer tratamento radical, com cirurgia, normalmente, seguida de radioterapia pós-operatória ou quimioterapia, associados com toxicidade aguda e sequelas. Apesar dos recentes avanços nas técnicas de cirurgia e radioterapia, aproximadamente metade dos tumores em estágio avançado apresentam recidivas nos dois primeiros anos após o tratamento. Outra preocupação é que, os casos de CECP apresentam baixas taxas de sobrevida global em cinco anos e, apesar dos esforços na tentativa de melhorar essas taxas, este índice permanece ao redor 50%. O desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas integradas às já existentes é de grande interesse para aumentar a taxa de sobrevida dos pacientes acometidos por esta doença maligna. A imunoterapia pode ser uma alternativa para as formas atuais de tratamento. Os antígenos câncer/testículo (CTAs) são expressos em tumores humanos de diferentes origens histológicas, mas não são comumente encontrados em tecidos normais, exceto testículo e placenta. Esse padrão restrito ao tumor, e sua alta imunogenicidade, evidenciam os CTAs como alvos ideais para abordagens imunoterapêuticas. Uma análise prévia dos CTAs expressos em CECP demonstrou que HORMAD1 e XAGE1 são frequentemente expressos nesses tumores. Objetivos: Melhor entender o papel dos CTAs HORMAD1 e XAGE1 na carcinogênse dos CECP, avaliando a função desempenhada por estas proteínas em diferentes processos tumorigênicos. Métodos: A expressão de HORMAD1 e XAGE1 foi avaliada em diferentes linhagens celulares de CECP por RT-PCR e esta expressão foi silenciada por shRNA. Ensaios funcionais foram realizados para avaliar o impacto da ausência de HORMAD1 e XAGE1. Resultados: A expressão de HORMAD1 e XAGE1 foi silenciada na linhagem celular JHU-028 e confirmada através de ensaios de Western Blot e qRT-PCR respectivamente. Os ensaios funcionais revelaram que a ausência de HORMAD1 levou a uma redução na proporção de células na fase G1 do ciclo celular e aumento na fase S, a uma diminuição da capacidade de migração e invasão celular e a um aumento nas taxas de apoptose e proliferação celular. O silenciamento do gene XAGE1 nesta mesma linhagem celular apresentou significativa associação com a redução da capacidade de invasão celular. Conclusões: Os resultados dos ensaios in vitro indicam que HORMAD1 e XAGE1 contribuem para o processo de tumorigênese dos CECP.
O Carcinoma Espinocelular de Cabeça e Pescoço (CECP) é a sexta neoplasia mais frequente no mundo. Aproximadamente um terço dos pacientes apresentam-se em estágios iniciais e são tratados com cirurgia ou radioterapia, com taxas de cura de 70-90%. Entretanto, a maioria dos pacientes é diagnosticada com doença em estágio avançado. Essa situação requer tratamento radical, com cirurgia, normalmente, seguida de radioterapia pós-operatória ou quimioterapia, associados com toxicidade aguda e sequelas. Apesar dos recentes avanços nas técnicas de cirurgia e radioterapia, aproximadamente metade dos tumores em estágio avançado apresentam recidivas nos dois primeiros anos após o tratamento. Outra preocupação é que, os casos de CECP apresentam baixas taxas de sobrevida global em cinco anos e, apesar dos esforços na tentativa de melhorar essas taxas, este índice permanece ao redor 50%. O desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas integradas às já existentes é de grande interesse para aumentar a taxa de sobrevida dos pacientes acometidos por esta doença maligna. A imunoterapia pode ser uma alternativa para as formas atuais de tratamento. Os antígenos câncer/testículo (CTAs) são expressos em tumores humanos de diferentes origens histológicas, mas não são comumente encontrados em tecidos normais, exceto testículo e placenta. Esse padrão restrito ao tumor, e sua alta imunogenicidade, evidenciam os CTAs como alvos ideais para abordagens imunoterapêuticas. Uma análise prévia dos CTAs expressos em CECP demonstrou que HORMAD1 e XAGE1 são frequentemente expressos nesses tumores. Objetivos: Melhor entender o papel dos CTAs HORMAD1 e XAGE1 na carcinogênse dos CECP, avaliando a função desempenhada por estas proteínas em diferentes processos tumorigênicos. Métodos: A expressão de HORMAD1 e XAGE1 foi avaliada em diferentes linhagens celulares de CECP por RT-PCR e esta expressão foi silenciada por shRNA. Ensaios funcionais foram realizados para avaliar o impacto da ausência de HORMAD1 e XAGE1. Resultados: A expressão de HORMAD1 e XAGE1 foi silenciada na linhagem celular JHU-028 e confirmada através de ensaios de Western Blot e qRT-PCR respectivamente. Os ensaios funcionais revelaram que a ausência de HORMAD1 levou a uma redução na proporção de células na fase G1 do ciclo celular e aumento na fase S, a uma diminuição da capacidade de migração e invasão celular e a um aumento nas taxas de apoptose e proliferação celular. O silenciamento do gene XAGE1 nesta mesma linhagem celular apresentou significativa associação com a redução da capacidade de invasão celular. Conclusões: Os resultados dos ensaios in vitro indicam que HORMAD1 e XAGE1 contribuem para o processo de tumorigênese dos CECP.
Descrição
Citação
CORDARO, Viviane Carlin. Análise funcional de antígenos câncer/testículo em linhagens celulares de cabeça e pescoço. 2015. 60 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2015.