Estudo bioanalítico e proteômico de sarcoma de Hippopotumus amphibius
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Data
2014-10-24
Autores
Silva, Adriana Rodrigues [UNIFESP]
Orientadores
Assunção, Nilson Antonio de [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Resumo
This project aims to analyse the protein profile of a Hippopotamus amphibius' sarcoma. Using proteomic analysis on three tissue samples of an animal that passed away due to the advanced stage of the disease, an origin tumor, a heart metastasis and an healthy tissue. Initially, the protein separation was programmed to be performed using bi-dimensional electrophoresis. The small quantity of tissue sample also forced us to use a second methodology, without previous protein separation processes. After the protein samples were handled, they were submitted to the trypsin enzymatic action, followed by purification. The next stage involved the sample analysis using liquid chromatography coupled with mass spectrometry, and data analysis using the Mascot software. The small quantity of tissue samples available made the use of a second methodology necessary, in order to obtain complementary data. Samples from the primary tumor, the heart metastasis, and healthy tissue were submitted to the shot gun, without previous separation of the proteins, going through enzymatic digestion, and the resulting peptides processed with chromatographic separation coupled with mass spectrometry, using the same identification strategy in the first methodology. Though the bi-dimensional gel separation is an expensive and time-costly methodology, it proved to be the more adequate to identify proteins involved in specific biological processes, such as the ones involved in diseases like cancer. The first methodology, that used a protein bi-dimensional gel separation, identified 33 proteins involved in the growth and development of tumors, and the second methodology, that have not used prior separation of the proteins, identified only 8 proteins that are possibly involved in the same cancer related processes. Both methodologies had great value on the development of this study, enabling the work with two strands of proteomics, aiding in the proposed objective, each offering a specific characteristic. The first one was more adequate to the identification of the proteins involved in specific biological processes. The second one, in the ample identification of the proteins expressed in the analyzed tissue. The results can be applied in future studies, that can verify the relation of these proteins with the development and functioning of tumors and the constant improvement of animal conservancy, offering a better understanding of the diseases that affected both animals and humans.
O presente trabalho almejou realizar o estudo do perfil proteico em sarcoma de Hippopotumus amphibius. Para isso, realizou-se a análise proteômica a partir de três amostras do animal, que veio a falecer devido a doença, o tumor primário, metástase no coração e tecido saudável. Inicialmente realizou-se separação das proteínas do tumor primário e tecido saudável através da eletroforese bidimensional. Posteriormente as proteínas separadas foram digeridas enzimaticamente através da tripsina. A etapa seguinte foi a separação dos peptídeos resultantes por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas, e análise de dados com auxilio com o software Mascot. A pouca quantidade de amostras de tecido disponíveis tornou necessária a utilização de uma segunda metodologia afim de obter resultados complementares. Amostras de tumor primário, metástase de coração, e tecido saudável foram submetidas ao shot gun, sem realizar a separação prévia das proteínas presentes, passando por digestão enzimática, e os peptídeos resultantes passaram também por separação cromotográfica acoplada à espectrometria de massas, utilizando a mesma estratégia de identificação que a primeira metodologia. Embora a separação em gel bidimensional seja uma metodologia com elevado custo operacional e temporal, mostrou ser a mais adequada para a identificação de proteínas envolvidas em processos mais específicos, como as proteínas envolvidas em doenças como o câncer. A primeira metodologia, que utilizou a separação em gel bidimensional, identificou 33 proteínas envolvidas no crescimento e desenvolvimento de tumores e a segunda metodologia, que não utilizou uma separação prévia das proteínas, identificou apenas 8 proteínas, também possivelmente envolvidas nos mesmos processos. Ambas as metodologias tiveram grande valor ao desenvolvimento deste estudo, proporcionando o trabalho com duas vertentes da proteômica, auxiliaram no cumprimento do objetivo proposto, cada qual com sua característica específica. A primeira, mais adequada para a identificação de proteínas envolvidas em processos biológicos mais específicos, A segunda, em uma identificação mais abrangente das possíveis proteínas expressas nos tecidos estudados. Os resultados obtidos terão aplicação em estudos futuros, em que poderá ser verificada a relação dessas proteínas com o desenvolvimento e funcionamento de tumores e também para a constante melhoria da conservação animal, oferecendo entendimento das doenças que os atingem tanto animais como humanos.
O presente trabalho almejou realizar o estudo do perfil proteico em sarcoma de Hippopotumus amphibius. Para isso, realizou-se a análise proteômica a partir de três amostras do animal, que veio a falecer devido a doença, o tumor primário, metástase no coração e tecido saudável. Inicialmente realizou-se separação das proteínas do tumor primário e tecido saudável através da eletroforese bidimensional. Posteriormente as proteínas separadas foram digeridas enzimaticamente através da tripsina. A etapa seguinte foi a separação dos peptídeos resultantes por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas, e análise de dados com auxilio com o software Mascot. A pouca quantidade de amostras de tecido disponíveis tornou necessária a utilização de uma segunda metodologia afim de obter resultados complementares. Amostras de tumor primário, metástase de coração, e tecido saudável foram submetidas ao shot gun, sem realizar a separação prévia das proteínas presentes, passando por digestão enzimática, e os peptídeos resultantes passaram também por separação cromotográfica acoplada à espectrometria de massas, utilizando a mesma estratégia de identificação que a primeira metodologia. Embora a separação em gel bidimensional seja uma metodologia com elevado custo operacional e temporal, mostrou ser a mais adequada para a identificação de proteínas envolvidas em processos mais específicos, como as proteínas envolvidas em doenças como o câncer. A primeira metodologia, que utilizou a separação em gel bidimensional, identificou 33 proteínas envolvidas no crescimento e desenvolvimento de tumores e a segunda metodologia, que não utilizou uma separação prévia das proteínas, identificou apenas 8 proteínas, também possivelmente envolvidas nos mesmos processos. Ambas as metodologias tiveram grande valor ao desenvolvimento deste estudo, proporcionando o trabalho com duas vertentes da proteômica, auxiliaram no cumprimento do objetivo proposto, cada qual com sua característica específica. A primeira, mais adequada para a identificação de proteínas envolvidas em processos biológicos mais específicos, A segunda, em uma identificação mais abrangente das possíveis proteínas expressas nos tecidos estudados. Os resultados obtidos terão aplicação em estudos futuros, em que poderá ser verificada a relação dessas proteínas com o desenvolvimento e funcionamento de tumores e também para a constante melhoria da conservação animal, oferecendo entendimento das doenças que os atingem tanto animais como humanos.
Descrição
Citação
SILVA, Adriana Rodrigues. Estudo bioanalítico e proteômico de sarcoma de Hippopotumus amphibius . 2014. 177 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Diadema, 2014.