Identificação dos aminoácidos essenciais para ligação com imunoglobulinas E nos principais epitopos da alfa s1-caseina

Abstract

Objetivo: Identificar os aminoacidos essenciais a ligacao com IgE nos epitopos da as 1¬caseina. Materiais e Metodos: Os epitopos da αs 1-caseina, com extensao variavel de 10 a 14 AA, foram sintetizados em membranas de celulose, em sua forma original e modificados atraves de substituicoes unicas ou multiplas de aminoacidos (alanina ou glicina). As membranas foram expostas ao soro de pacientes comprovadamente alergicos ao LV, com amostras individuais (oito pacientes isolados) ou conjugadas de 15 pacientes. A afinidade a IgE de cada peptideo foi mensurada atraves de densitometria optica. Resultados: Apos substituicao de um unico AA, dois dos oito peptideos testados perderam totalmente a capacidade de ligacao com a IgE quando expostos ao soro conjugado de pacientes e diminuicao da afinidade pelos peptideos restantes foi obtida. Posteriormente, a substituicao concomitante de mais de um aminoacido (dois a quatro) levou a anulacao da ligacao antigeno-anticorpo em todos os peptideos. Em quatro dos oito epitopos, os aminoacidos essenciais identificados pela amostra conjugada de soros nao foram os mesmos reconhecidos por todos os pacientes individualmente, e sua substituicao manteve a capacidade de ligacao com a IgE em pelo menos um dos pacientes. Nestes individuos, outros aminoacidos foram identificados como essenciais, indicando um padrao heterogeneo de reconhecimento. Conclusao: O estudo demonstra que substituicoes unicas ou multiplas de AA nos epitopos da αs 1-caseina promovem uma reducao na capacidade de ligacao da IgE especifica aos peptideos alergenicos nos pacientes com ALV. No entanto, a heterogeneidade no padrao de reconhecimento dos AA essenciais preconiza a necessidade de novos metodos para determinacao individual dos AA, com a finalidade de se desenvolver imunoterapia especifica para ALV a partir de proteinas recombinantes