Expressão de genes relacionados as subpopulações de linfócitos t reguladores e th17 em sangue periférico de pacientes submetidos ao transplante de células hematopoéticas: importância prognóstica na doença do enxerto contra hospedeiro.

Abstract

Introdução: Apesar de todos os avancos relacionados ao Transplante de celulas hematopoeticas (TCH), a doenca do enxerto contra hospedeiro (DECH) continua a ser uma complicacao frequente, repercutindo diretamente na morbimortalidade relacionada ao transplante. Os linfocitos T reguladores (Treg) desempenham papel fundamental na manutencao da auto-tolerancia imunologica e sua recuperacao adequeda em numero e funcao apos o TCH, seria fator importante para o efetico controle de linfocitos T citotoxicos e ausencia de DECH. Mais recentemente, as celulas Th17 parecem contribuir para o desenvolvimento da DECH atraves do aumento da producao de citocinas pro-inflamatorias e recrutamento de linfocitos Th1 em orgaos linfoides na fase inicial apos o TCH. Entretanto, grande parte do conhecimento a respeito do papel das celulas Treg e, principalmente Th17 na DECH vem de modelos experimentais em camundongos e os resultados em humanos ainda sao bastante divergentes. Objetivos: 1) Avaliar a expressao de gene especifico para caracterizacao da subpopulacao de linfocitos Treg (FOXP3) e linfocitos Th17 (RORt) em amostras de sangue periferico obtidas de pacientes submetidos a TCH alogenico de doador HLA-identico aparentado. 2) Correlacionar o perfil de expressao dos genes FOXP3 e RORt com a presenca ou ausencia de DECH na populacao estudada. Pacientes e Metodos: cinquenta e um pacientes submetidos ao transplante de celulas hematopoeticas (TCH) alogenico HLA-identicos foram incluidos no estudo. Amostras de sangue periferico foram coletadas pre-TCH, no momento da DECH aguda, no momento da DECH cronica e no D+90 dias pos-TCH naqueles que nao tiveram sinais clinicos de DECH aguda. A expressao dos genes FOXP3 e RORt, como principais representantes das subpopulacoes de linfocitos Treg e Th17, respectivamente, foi avaliada por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). Resultados: Foram avaliados 51 pacientes neste estudo, sendo todos os pacientes submetidos a TCH alogenico aparentado HLA-identico, com idade mediana de 36 anos (16-69). As leucemias agudas/Sindrome mielodisplasica foram as principais indicacoes de TCH (61%), assim como predominaram a utilizacao de fonte periferica de celulas hematopoeticas (77%), condicionamento mieloablativo (82%) e como regime preparatorio para o TCH a combinacao de bussulfano e ciclofosfamida (51%). Durante o tempo de seguimento, o tempo mediano de Sobrevida Global e Sobrevida Livre de Progressao foi de 43.3 meses e 33 meses, respectivamente. A mortalidade nao relacionada a recaida foi de 31.4% em 1 ano, sendo a DECH cronica a principal causa de obito (31%). A incidencia cumulativa de DECH aguda em 100dias foi de 45.1% e de DECH cronica de 58.8% em 1 ano. O acometimento de dois ou mais orgaos na DECH-A (96%) e DECH-C (71%) predominou. Quanto a classificacao, 48% dos pacientes com DECH-A foram Grau II e a maioria dos pacientes com DECH-C (74%) foram classificados como grave. Foi observado menor expressao do gene FOXP3 no momento da DECH-A (p=0.003) e DECH-C (p= 0.039) ao realizar analise pareada com suas respectivas amostras do pre-TCH. Nao houve alteracao da expressao do gene RORt no momento da DECH aguda e cronica. Nao foram encontradas diferencas estatisticamente significantes da expressao dos genes FOXP3 e RORt nos diferentes graus de severidade da DECH aguda ou cronica. Da mesma forma que nao demonstraram ser uma ferramenta na predicao de desfechos clinicos na DECH-A. Conclusoes: Houve diminuicao da expressao do gene FOXP3 nas amostras no momento da DECH-A e DECH-C comparativamente as suas respectivas amostras pre-TCH em pacientes submetidos ao TCH alogenico aparentado HLA-identico. Nao houve alteracao na expressao do gene RORt no momento da DECH, tanto aguda quanto cronica, quando comparado ao grupo controle e ao grupo de pacientes sem sinais clinicos de DECH submetidos ao TCH alogenico aparentado HLA-identico. A expressao de FOXP3 e de RORt nao se correlacionou ao prognostico da DECH, nao predizendo mortalidade.