Compostos com papel espermicida desenhados a partir do polipeptídeo ATx isolado do veneno da aranha Latrodectus mactans do Chile
Data
2013
Autores
Ambrosio, Lilian Faccioli de Sousa 
Orientadores
Miranda, Antonio de
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
O ATx e um polipeptideo isolado a partir do veneno da aranha Latrodectus mactans do Chile, constituido de 69 residuos de aminoacidos (PM = 7843,7009 Da), e entre eles seis residuos de cisteina que formam tres pontes de dissulfeto, a partir dessa estrutura desenhamos 4 novos analogos com as seguintes estruturas:Ala43]-ATx41-60-NH2, Ac-SLAKTNCFTTEYFQHCVKDL-NH2; Ac-[Ala43, Ser47,56]-ATx41-60-NH2, Ac-SLAKTNSFTTEYFQHSVKDL-NH2; Ac-ATx46-60-NH2, Ac-NCFTTEYFQHCVKDL-NH2; Ac-ATx46-57-NH2, Ac-NCFTTEYFQHCV-NH2. Esses peptideos foram obtidos pelo metodo de sintese de fase solida pela estrategia FMOC, em seguida os analogos foram clivados, purificados (CLAE) e caracterizados por CL/EM-IES e AAA. A analise de estrutura secundaria foi feita pela tecnica de dicroismo circular (CD), onde foram testadas a influencia do pH, SDS (1 e 15 mM), e TFE (10, 30, 50 e 70%) e de H2O na conformacao dos fragmentos. A estabilidade dos derivados do ATx foram estudadas nos seguintes fluidos biologicos: semen humano e de rato, secrecao vaginal de coelha, e plasma humano. Foram avaliadas tambem a motilidade e viabilidade dos espermatozoides (humano e rato) em contato com os peptideos. Observamos um comportamento conformacional semelhante de todos os fragmentos quando analisados por CD quanto a variacao do pH, onde todos apresentaram um tendencia de estrutura randomica. Ja em SDS todos os fragmentos apresentaram uma tendencia de conformacao em alfa-helice, assim como na presenca de TFE. Finalmente, em agua todos os peptideos tambem apresentaram uma estrutura randomica. Nos estudos de semen e plasma humano a estabilidade de todos os fragmentos foram preservadas num periodo de incubacao de ate 120 minutos. Na estabilidade de fluido vaginal de coelha o unico analogo mais degradado foi o Ac-[Ala43, Ser47,56]-ATx41-60-NH2, mas somente apos um periodo deproximadamente 24 horas de incubacao. Os estudos de motilidade e viabilidade apontaram que o fragmento linear, Ac-[Ala43, Ser47,56]-ATx41-60-NH2, apresentou os melhores resultados, ja que foi capaz de diminuir um pouco a viabilidade, mas principalmente reduzir significativamente as motilidades dos espermatozoides. Um possivel mecanismo para esta acao espermicida e que pelo aumento do calcio intracelular e pela reducao do pH intracelular dos espermatozoides, haja como consequencia desta acidificacao, uma inativacao dos canais de calcio do flagelo e/ou uma liberacao dos estoques de calcio intracelulares, que por sua vez ajudariam os espermatozoides a ficarem no estado imovel
Descrição
Citação
AMBRÓSIO, Lilian Faccioli de Sousa Compostos com papel espermicida desenhados a partir do polipeptídeo ATx isolado do veneno da aranha Latrodectus mactans do Chile.2013. 130f. Tese (Doutorado em Biologia Molecular) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2013.