Avaliacao de uma potencial correlacao entre capacidade de invasao de celulas intestinais cultivadas in vitro, subtipos de intimina e expressao da proteina efetora EspT em Escherichia coli Enteropatogenica (EPEC) Atipica
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Data
2012
Autores
Pacheco, Veronica Carvalho Rezende [UNIFESP]
Orientadores
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Escherichia coli enteropatogenica (EPEC) tipica (tEPEC) e EPEC atipica (aEPEC) diferem quanto a ocorrencia do plasmideo EAF (EPEC adherence factor) nas tEPEC e sua ausencia nas aEPEC. Ambas produzem lesao attaching-effacing em celulas eucarioticas, sendo que a aderencia intima observada nessa lesao e mediada pela proteina bacteriana intimina. Variacoes na porcao de ligacao de intimina aos enterocitos definem diferentes subtipos da proteina. Neste estudo, a capacidade invasora de aEPEC portadoras de subtipos de intimina alfa, beta, gama e omicron foi avaliada em celulas intestinais Caco-2 diferenciadas in vitro e a participacao da proteina efetora EspT no mecanismo de invasao de amostras selecionadas foi determinada. Para comparacao, foi empregada a amostra JPN15, derivada da tEPEC E2348/69 por perda do plasmidio EAF. Somente duas aEPEC (EC423/03, intimina beta, e 1551-2, intimina omicron) apresentaram indices de invasao (4,75 + 1,50 e 4,72% ± 0,95, respectivamente) significativamente maiores do que JPN15, em ensaios de protecao com gentamicina. Dessas duas amostras, apenas a 1551-2 persistiu intracelularmente ate 48 h. O gene que codifica EspT, uma proteina que ativa GTPases Rac1 e Cdc42 levando a invasao celular, foi identificado em apenas duas aEPEC nao invasoras. As insercao e expressao de espT em JPN15 (nao invasora) e 1551-2 (invasora) nao alterou seus indices de invasao. Neste estudo, demonstramos que o processo de invasao de celulas Caco-2 por aEPEC nao depende exclusivamente do subtipo de intimina, e que a capacidade invasora nao esta diretamente relacionada com persistencia e/ou multiplicacao intracelular. Alem disto, verificamos que a proteina efetora EspT nao e o fator determinante do potencial invasor em aEPEC
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2012. 77 p.