Efeitos moleculares de curto prazo da varicocele experimental sobre a expressao de receptores hormonais e proteinas testiculares
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Data
2011
Autores
Soares, Thiago da Silva [UNIFESP]
Orientadores
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Varicocele causa uma dilatacao anormal do plexo pampiniforme, das veias espermaticas e colaterais que chegam a iliaca e esta associada a infertilidade masculina. O objetivo deste estudo visa avaliar os efeitos da varicocele, induzida cirurgicamente em ratos, na histologia e na morfologia dos tubulos seminiferos, nos niveis de testosterona e estradiol plasmatico e tecidual, na expressao de proteinas testiculares, incluindo mais detalhadamente a analise da expressao dos receptores de androgeno (AR) e estrogeno (ESR1, ESR2 e GPER) no testiculo. Ratos com 40-42 dias de idade foram divididos em dois grupos experimentais, animais submetidos a oclusao parcial da veia renal esquerda para a inducao da varicocele e animais falso-operados (controle). Apos 4 semanas da cirurgia, os animais foram sacrificados e o diametro da veia espermatica esquerda foi avaliado e observado um aumento de cerca 3 vezes no diametro desta veia nos animais com varicocele. O sangue foi retirado e o plasma separado, os testiculos direito e esquerdo foram retirados e dissecados. As concentracoes de testosterona plasmatica e tecidual e de estradiol plasmatico foram determinadas por radioimunoensaio. A varicocele nao alterou a concentracao plasmatica de estradiol e testosterona nem a concentracao de testosterona no testiculo direito e esquerdo. Cortes histologicos dos testiculos foram obtidos e corados com hematoxilina e eosina e analisados com o auxilio de um microscopio de luz. Nao foram observadas alteracoes histologicas nos testiculos de ratos submetidos a varicocele quando comparadas com os testiculos obtidos do animal controle. Foi observada somente uma diminuicao (3,8%) no diametro dos tubulos seminiferos de ratos com varicocele. O RNA total foi extraido dos testiculos direito e esquerdo de ratos controle e com varicocele. Os transcritos para AR, ERS1, ERS2, GPER e β-actina (controle endogeno) foram avaliados por PCR em tempo real. Foram tambem realizados ensaios de Western blot com o extrato total de testiculos e anticorpos especificos contra AR, ESR1, ESR2 e GAPDH (controle endogeno). Os controles negativos dos ensaios de Western Blot foram realizados pela incubacao da membrana na presenca do anticorpo primario previamente incubado com o respectivo peptideo bloqueador. A varicocele nao alterou os niveis dos transcritos para AR, ERS1, ERS2, mas diminuiu a expressao do transcrito para o GPER no testiculo esquerdo. Com relacao a proteina, a varicocele diminuiu significativamente a expressao do AR, 53% e 46% respectivamente, no testiculo esquerdo e direito. A varicocele nao alterou a expressao do ERS1 e ERS2. A expressao do GPER ainda nao foi determinada. Proteinas solubilizadas do extrato testicular obtidas do testiculo esquerdo de ratos controle e com varicocele foram submetidas a eletroforese bidimensional. Foram identificados 617 spots proteicos no testiculo de rato controle e com varicocele. 29 spots proteicos foram diferencialmente regulados pela varicocele. A varicocele induziu um aumento na expressao de 6 spots proteicos e uma diminuicao na expressao de 23 spots proteicos presentes no testiculo. Estas proteinas foram identificadas por espectrometria de massa. A varicocele levou ao aumento da expressao da proteina RACK1 (receptor for activated C kinase), que esta envolvida com a regulacao do AR. A varicocele tambem diminuiu a expressao de diferentes proteinas, como por exemplo, diidrolipoamida desidrogenase, alfa-enolase, transtiretina e pirofosfatase 1, que estao envolvidas com a maturacao e reacao acrossomica do espermatozoide. Em conclusao, o presente estudo mostra que a varicocele diminui a expressao do AR, mecanismos pos-transcricionais provavelmente estao envolvidos. Esta regulacao do AR pode ter um importante papel na disfuncao testicular. Alem disso, a varicocele diminui a expressao de varias proteinas testiculares, as quais podem ser potenciais alvos para avaliar a funcao do espermatozoide e possivelmente a infertilidade
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2011. 137 p.