Pesquisa de dissomia uniparental (DUP) em pacientes com atrofia muscular espinhal (AME)
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Data
2011
Autores
Silva, Luciana Rodrigues Jacy da [UNIFESP]
Orientadores
Perez, Ana Beatriz Alvarez [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Objetivos: Padronizar a tecnica de pesquisa de DUP por marcadores microssatelites em gel de acrilamida e coloracao com a prata. Demonstrar a variacao do padrao de bandas dos marcadores microssatelites escolhidos em uma amostra controle. Realizar o diagnostico molecular da delecao do exon 7 no gene SMN1 em pacientes com AME. Verificar a presenca de DUP do cromossomo 5 em pacientes com AME sem recorrencia na irmandade e sem consanguinidade parental. Comparar os resultados obtidos atraves da tecnica de marcadores microssatelites e SNP array. Metodos: Foram utilizados 11 marcadores microssatelites para todos os pacientes. Em uma familia foi realizado o teste de portador para AME e cariotipo da probanda na qual foi encontrada regiao de DUP paterna. Para os experimentos com arrays foram utilizadas plataformas Genome-Wide Human SNP Array 6.0 (Affymetrix) segundo os protocolos do fabricante. Resultados: Na primeira etapa do trabalho os marcadores foram utilizados para padronizacao dos metodos. A segunda etapa foi composta por triades de pai, mae e filho com diagnostico clinico de AME. A analise com os marcadores microssatelites em 11 familias revelou padroes normais de heranca mendeliana biparental. A analise com os marcadores microssatelites em uma familia revelou ausencia de alelos maternos para dois marcadores, sugerindo DUP paterna do cromossomo 5. O estudo citogenetico realizado na probanda apresentou cariotipo normal. A analise quantitativa do numero de copias dos genes SMN1 e SMN2 no exon 7, revelou no pai uma copia do gene SMN1 e duas copias do gene SMN2, indicando que ele e portador assintomatico de AME e a analise realizada na mae revelou 2 copias do gene SMN1 e uma copia de SMN2, demonstrando que ela nao e portadora assintomatica de AME. A analise do resultado do SNP array verificou perda de heterozigosidade nas regioes 5p14.3, 5q23.1 e 5q31.2-q31.3. Alem da perda de heterozigosidade, o SNP array detectou uma delecao de 1.3Mb envolvendo o gene SMN1. Conclusoes: A pesquisa de DUP atraves do estudo de marcadores microssatelites foi padronizada de maneira rapida e eficiente. O padrao de bandas para os marcadores estudados nao variou na amostra estudada. O diagnostico molecular da delecao do exon 7 no gene SMN1, responsavel por 98% das mutacoes nesse gene, foi realizada em todos os pacientes. Foi possivel verificar regioes de DUP paterna em 1 dos 12 pacientes estudados. A tecnica de SNP array confirmou a presenca de regioes com perda de heterozigosidade. Adicionalmente foi encontrada uma delecao na regiao que contem o gene responsavel pela doenca em estudo
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2011. 139 p.