Analise do perfil proteomico do plasma seminal de pacientes com lesao medular
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Data
2010
Autores
Silva, Barbara Ferreira da [UNIFESP]
Orientadores
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Introdução: A lesao de medula espinhal e fator limitante na fertilidade masculina, resultando em alteracoes tanto na funcao ejaculatoria quanto na qualidade seminal. Frequentemente, grande parte dos homens com lesao medular recorre aos metodos que estimulam a ejaculacao com o objetivo principal de obter semen para utilizacao em tecnicas de reproducao assistida. Contudo, as causas que levam a baixa qualidade seminal nesses pacientes ainda nao foram elucidadas. Objetivos: Tracar o perfil proteico do plasma seminal de individuos sem lesao medular (incluidos como grupo controle)e de pacientes com lesao medular submetidos a duas diferentes tecnicas de ejaculacao assistida (eletroejaculacao [EEJ] e estimulacao vibratoria peniana [EVP]). Estabelecer e estudar mapas de interacao proteina-proteina (interactoma), construidos a partir dos perfis proteicos obtidos e compara-los entre os grupos.Estudar os interactomas do ponto de vista de enriquecimento funcional para as categorias de Gene Ontology (GO). Metodo:As amostras seminais de 10 homens sem lesao medular e 12 pacientes com lesao medular (6 submetidos a EEJ e 6 submetidos a EVP) foram obtidas e analisadas de acordo com os parametros da OMS (1999) e morfologia segundo criterio estrito de Kruger(1986).O perfil proteico do plasma seminal foi analisado por duas abordagens proteomicas independentes: MSE e eletroforese bidimensional em gel poliacrilamida (2D SDS-PAGE). Primeiramente foi feita a quantificacao das proteinas totais em cada amostra e um pool representativo de cada grupo (controle, EEJ e EVP) foi formado. As proteinas foram solubilizadas, alquiladas e enzimaticamente digeridas para o experimento de nanoUPLC tandem nanoESI- MSE.Para o experimento de 2D SDS-PAGE, as proteinas foram quantificadas e, para uma analise individual, um gel por paciente foi corrido. As proteinas foram separadas em uma fita de 18cm, pI 3-10, em gel de gradiente 10-17.5%. Os geis foram corados, digitalizados e comparados atraves do ImageMaster 2D platinum 7.0. Os spots de interesse (estatisticamente diferentes entre os grupos) foram retirados dos geis e as proteinas foram identificadas atraves do espectrometro de massas ESI-Q-ToF MS/MS. Os resultados obtidos pelas duas abordagens proteomicas foram apresentados sob a forma de lista de proteinas identificadas a partir das quais foram construidas as redes de interacoes proteicas com 0 grau de interacao utilizando-se o software Cytoscape. Posteriormente, para o estudo e a caracterizacao das anotacoes funcionais mais representadas de GO o plugin BinGO foi utilizado. Resultados: Como resultado da tecnica de MSE, um total de 638 diferentes proteinas foram identificadas, as quais dividiram-se em: 397 proteinas comuns aos tres grupos, 52 proteinas comuns aos tres grupos, mas diferencialmente expressas, 35 proteinas exclusivas do grupo controle, 66 proteinas exclusivas do grupo EEJ e 88 proteinas exclusivas do grupo EVP. Por outro lado, um total de 84 diferentes proteinas foram identificadas pela eletroforese bidimensional de proteinas seguida por MS/MS. Desse total, 48 proteinas mostraram-se comuns aos tres grupos, 3 exclusivas nos grupos controle e EEJ, 8 exclusivas nos grupos controle e EVP, 8 exclusivas nos grupos EEJ e EVP,3 exclusivas no grupo controle, 11 exclusivas no grupo EEJ e 3 exclusivas no grupo EVP. A analise no Cytoscape revelou que processos reprodutivos centrais,como inseminacao, fusao da membrana espermatica com o oocito e reacao acrossomica, estao relacionados aos tres grupos; resposta inflamatoria de fase aguda e resposta frente a estimulos desencadeados por trigliceridios, estao relacionadas aos tres grupos; processos relacionados a actina como o funcionamento da musculatura esqueletica, ligacao a componentes do citoesqueleto e resposta ao ion calcio, estao relacionados apenas aos grupos EEJ e EVP;processos ligados a homeostase, transporte e oxidacao do ion ferro, estao relacionados apenas aos grupos EEJ e EVP;resposta direta a peroxido de hidrogenio e hipoxia, esta relacionada apenas ao grupo EVP;resposta imune acentuada, relacionada a imunidade humoral, hipersensibilidade do tipo IIa e ativacao do sistema complemento, esta relacionada apenas ao grupo EVP. Conclusoes:A expressao de proteinas, no plasma seminal mostrou-se diferente entre os grupos; a lesao medular promove alteracoes no perfil proteico do plasma seminal; as diferencas funcionais observadas entre os grupos EEJ e EVP parecem nao estar relacionadas as tecnicas de ejaculacao assistida;algumas proteinas identificadas podem ser candidatas a biomarcadores de fertilidade ou infertilidade masculina
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Citação
São Paulo: [s.n.], 2010. 190 p.