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dc.contributor.advisorHan, Sang Won [UNIFESP]
dc.contributor.authorMachado, Tamara da Rocha [UNIFESP]
dc.date.accessioned2015-12-06T23:06:23Z
dc.date.available2015-12-06T23:06:23Z
dc.date.issued2005
dc.identifier.citationSão Paulo: [s.n.], 2005. 83 p.
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/21002
dc.description.abstractA epressão do gene bsr leva à síntese da blasticidina S desaminase, que catalisa a reação de desaminação do antibiótico blasticidina S (BS) inativando-o. Como a atividade da enzima é específica para a BS e não para seus análogos, como a citosina ou citidina, o sistema bsr e BS tem sido usado amplamente para experimentos de transformação celular. Com o objetivo de acelerar o processo de seleção, que é uma etapa determinante para a transferência gênica ex vivo, o gene bsr foi modificado nas regiões não codificantes para aumentar a sua expressão gênica, e essa nova versão foi denominada de bsrm. A eficácia do sistema bsrm/BS foi testada em diversos tipos celulares satisfatoriamente, exceto para os queratinócitos. Quando o bsrm foi introduzido nos queratinócitos via vetor retroviral, estas células entraram em apoptose em poucos dias. Parece que a expressão do gene bsrm instabiliza os queratinócitos e provoca estresse celular. A conseqüência disso é a geração de uma série de produtos de estresse oxidativo, tais como o peróxido de hidrogênio e o malonaldialdeído, que são extremamente tóxicos. Para entender o mecanismo molecular e genético de morte celular iniciada com a expressão do gene bsrm, a primeira pergunta que surge é se existe algum substrato da BS desaminase nos queratinócitos. Como a procura deste substrato é uma tarefa muito difícil, a pergunta foi refeita da seguinte forma: a atividade enzimática de BS desaminase é responsável pelo início do processo da morte dos queratinócitos? Esta pergunta tem o apoio de alguns resultados anteriores com o gene bsd, que foi isolado do fungo A. terreus e tem apenas 27,2 por cento de homologia em relação ao bsr. O bsd expressa a BS desaminase com a atividade enzimática bem superior à expressa pelo bsr, mas não tem efeito tóxico nos queratinócitos. Para responder a pergunta do trabalho, inicialmente os sítios responsáveis pela atividade enzimática foram identificados e seus mutantes foram gerados: E61 A, E61 D, C59A, C100A e C103A. Os vetores retrovirais dos mutantes de bsrm foram gerados para comparar com o vetar retroviral LBmSN, que tem a mesma estrutura de vetar que s mutantes, mas carrega o gene bsrm selvagem. Inicialmente, as células produtoras de vírus PA317 mutantes do bsrm e as células alvo, NIH3T3 mutantes do bsrm, foram testadas quanto à capacidade de resistência contra a BS. Todas as células que expressam os mutantes não...(au).pt
dc.format.extent83 p.
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsAcesso restrito
dc.subjectQueratinócitospt
dc.subjectMorte celularpt
dc.subjectGenes reporterpt
dc.subjectTécnicas de cultura de célulaspt
dc.titleA atividade da BS desaminase não é responsável pela morte dos queratinóides que expressam o gene bsrm(gene de resistência a BS modificado)pt
dc.title.alternativeBS deaminase activity is not responsible of induced bsrm gene keratinocyte's deathen
dc.typeDissertação de mestrado
dc.identifier.fileepm-20060223114312GARCIA.pdf
dc.description.sourceBV UNIFESP: Teses e dissertações
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt


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