Identificação de genes candidatos determinantes da hipertensão arterial, utilizando o estudo de expressão gênica diferencial em linhagens de animais congênicos
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Data
2005
Autores
Aneas, Ivy [UNIFESP]
Orientadores
Krieger, Jose Eduardo [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Hipertensão arterial é uma doença multifatorial e que representa um dos maiores obstáculos para a identificação das alterações gênicas específicas. Utilizando técnicas de total genome scan, identificamos a presença de 2 QTLs no cromossomo 2, associados à pressão arterial após sobrecarga salina, a partir do cruzamento entre a linhagem geneticamente hipertensa (SHR) e a normotensa Brown Norway (BN). Animais congênicos contendo um intervalo de 28,5 cM do cromossomo 2 (CH2C) foram desenvolvidos, utilizando retrocruzamentos e marcadores moleculares para fixar o respectivo segmento do genoma do rato BN no SHR. Medidas direta da pressão arterial em animais CH12C (n=22) demonstraram uma redução significativa de 20 mmHg na pressão sistólica basal quando comparado a linhagem parental SHR (n=22) (187,3 ± 2,3 vs. 167,7 ± 2,0'` mmHg, p<0.05). Várias estratégias foram utilizadas para a investigação de genes candidatos, mapeados no intervalo de interesse, cujo padrão de expressão renal apresentava-se diferenciado entre ratos machos, de 12 semanas de idade, das linhagens CH2Cc e SHRc. Foram localizados 15 genes diferenciais no intervalo de interesse de 9 cM confirmados por real time PCR: LOC 295235, Syt11, Tpm3, S100a10, LOC310681, Vdup1, Hmgcs2, Hao3, Unr, Slipr, SIc16a1, Cd53, Gstm1, Col11 a1, LOC295394. Utilizando valores de LOD score, selecionamos o gene VDUP1 (75 por cento aumentado no CH12C comparado ao SHR, p<0,05) como um potencial gene candidato à hipertensão arterial. A análise estrutural e a comparação de seqüências entre diferentes linhagens permitiram a identificação de dois polimorfismos na região promotora do gene. O SHR possui a inserção de um G na posição - 622 e de um A na posição - 676 do início da tradução (+1). A investigação in vitro, através de ensaios de gene reporter, confirmou a hipótese de que pelo menos um destes polimorfismos influencia o controle de expressão do VDUP1. Ainda, a seqüência CGA apresentou alteração no padrão de interação com proteínas renais nucleares, sendo consistente ao observado. Em conjunto, estes resultados demonstram que a redução da pressão arterial, após a troca de um fragmento cromossômico, entre as linhagens SHR e BN, confirma a hipótese testada de que a região C do cromossomo 2 contribui para a determinação da hipertensão arterial neste modelo de hipertensão espontânea em ratos (SHR). Dos 15 genes identificados, apenas um, o VDUP1, foi investigado e apresenta alterações estruturais capazes de influenciar a atividade promotora e deverá ser estudado em maior detalhe para avaliar se a modificação da expressão deste gene pode isoladamente influenciar a pressão arterial do SHR.
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2005. 177 p.