Estudo do fenomeno de heterorresitencia ao fluconazol em amostas clinicas de Candida glabrata

Abstract

Introdução: C. glabrata responde por numero significativo de infeccoes fungicas superficiais e sistemicas, particularmente em paises do hemisferio norte. No nosso meio, ainda ha poucas informacoes disponiveis sobre sua epidemiologia. Trata-se de levedura haploide, que exibe grande potencial de desenvolvimento de resistencia a antifungicos azolicos em pacientes expostos por longos periodos ao fluconazol. Considerando a maior facilidade de isolados clinicos de C.glabrata em desenvolver resistencia ao fluconazol e legitimo supor que subpopulacoes clonais com diferentes niveis de sensibilidade a este azolico possam estar presentes em pacientes colonizados e/ou infectados por tais microorganismos. O objetivo deste trabalho e pesquisar a presenca do fenomeno de heterorresistencia ao fluconazol em amostras clinicas de C. glabrata. Material e Metodos: Foram avaliadas 90 amostras clinicas de C. glabrata, provenientes de pacientes hospitalizados e ambulatoriais de 3 hospitais universitarios em São Paulo. Estas amostras foram submetidas a testes de susceptibilidade ao fluconazol, itraconazol, anfotericina B e 5-fluorocitosina pelo metodo de microdiluicao em caldo (NCCLS). Dados clinicos e epidemiologicos dos pacientes avaliados foram sistematicamente caracterizados em ficha clinica padrao. A triagem de heterorresistencia foi realizada atraves do cultivo de inoculo conhecido de isolados clinicos em meio contendo droga (fluconazol, 128gglmL). A verificacao do crescimento de macro e microcolonias em placa contendo meio agar Sabourauddextrose e fluconazol foi o criterio para a identificacao de sub-populacoes com padroes de sensibilidade diferentes a esta droga. Cepas assim identificadas tiveram o valor de concentracao inibitoria minima ao fluconazol determinado por metodo de microdiluicao em caldo (NCCLS, 1997). Confirmada a presenca de 2 populacoes originadas do mesmo cultivo com diferentes padroes de sensibilidade ao fluconazol, estas cepas foram congeladas para posterior avaliacao. Foram realizados cultivos seriados em meio livre de droga para avaliar a estabilidade do fenotipo de resistencia a droga testada. As macro (resistentes) e micro (sensiveis) colonias foram analisadas genotipicamente atraves de PFGE. Resultados: Das 90 amostras clinicas foi possivel a caracterizacao clinico-epidemiologica de 85. Verificamos que a idade media dos pacientes estudadosa(au)