Marcação de glicosamiglicanos para o estudo de interação célula-matriz

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Data
2003
Autores
Boucas, Rodrigo Ippolito [UNIFESP]
Orientadores
Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Glicosaminoglicanos possuem um importante papel em diversos processos biologicos, devido sua interacao com um grande numero de moleculas celulares. Para analise da ligacao dos GAGs com diferentes tipos celulares, heparina (HEP), heparina de baixo peso molecular (LMWH), heparam sulfato (HS), condroitim 4-sulfato (C4S), condroitim 6-sulfato (C6S) e dermatam sulfato (DS) foram conjugados com biotina. A conjugacao com biotina permite estudar a interacao do GAG e sua distribuicao nas celulas atraves da revelacao por estreptavidina por marcadores como peroxidase, assim como componentes fluorescentes. A presenca de biotina em cada glicosaminoglicano (GAG) foi avaliada por mapeamento em UM. e detectada por ensaio de blotting. Diversos estudos foram realizados com estes GAGs biotinilados para determinar as alteracoes estruturais causadas pelo processo de biotinilacao. A ligacao destes polimeros biotinilados foi investigada em celulas endoteliais e musculares lisas de aorta de coelho em cultura. Nos ensaios de cinetica de ligacao, os GAGS biotinilados mostraram uma curva dose dependente. A intensidade da ligacao em ambas linhagens celulares foi variavel e de acordo com a seguinte sequencia: HEP> HS> LMWH> DS. Curiosamente, C4S e C6S nao exibiram ligacao em ambas linhagens celulares. Resultados similares foram observados em microscopia de fluorescencia mostrando a ligacao de todos estes GAGs biotinilados somente na matriz extracelular. Estes resultados sugerem que estes marcadores podem ser usados para o entendimento das interacoes celula-matriz
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2003. 154 p.