Determinação da sequência primária do inibidor glicosilado das sementes de Bauhinia rufa
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Data
2003
Autores
Sumikawa, Joana Tomomi [UNIFESP]
Orientadores
Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Objetivo principal: Isolar e caracterizar a glicoproteina que apresenta atividade inibitoria de elastase detectada no extrato das sementes de Bauhinia rufa. Metodos: O inibidor foi purificado por precipitacao por acetona (80 por cento v/v), cromatografia de afinidade Con A Sepharose, cromatografia de troca ionica (HiTrap Q e ResourceTM Q em sistema FPLC), cromatografia de filtracao em gel SuperdexTm 200 (sistema FPLC) e cromatografia de fase reversa em coluna C1$ (sistema HPLC). gBrEl foi analisado por SDS PAGE para analise da massa molecular e deteccao de carboidratos. Resultados: pela analise eletroforetica o inibidor com atividade anti elastasica apresentou-se como uma cadeia unica com uma massa molecular aproximadamente de 20 kDa e pela coloracao com reagente de Schiff confirmou a presenca de carboidratos na estrutura da proteina. gBrEl inibe elastase pancreatica de porco e nao inibe elastase de neutrofilo humana, calicreina plasmatica humana, calicreina pancreatica de porco e tripsina. Atraves da analise por sequenciamento, a proteina e composta por 143 residuos de aminoacidos e o sitio de glicosilacao foi detectado em Asn 38 apresenta Mr. 1170 por espectrometria de massa. Discussao: A metedologia empregada para a purificacao do inibidor de elastase obteve rendimento de 21 e purificacao de cerca de 306 vezes. A constante de inibicao da elastase e de 6,18.10-8 M e a estequiometria de reacao e 1:2. Atraves da analise de similariedade (FASTA program) gBrEl apresenta-se muito similar aos inibidores da familia Kunitz de plantas e pela comparacao conservativa do sitio reativo, o...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2003. 114 p.