Método da citometria de imagem em esfregaço de melanoma cutâneo: material a fresco versus conservado em nitrogênio liquido

Abstract

A caracterizacao do potencial evolutivo biologico dos melanomas cutaneos e um problema importante e de dificil abordagem na pratica clinica e anatomopatologica. A dificuldade e ainda maior considerando-se a grande variabilidade no curso de melanomas aparentemente semelhantes. A determinacao quantitativa do ADN pela citometria de imagem baseia-se no conhecimento de que uma alteracao no conteudo dos cromossomas (aneuploidia) verificada pela analise da ploidia, indice de proliferacao e padrao da cromatina nuclear, correlaciona-se frequentemente com crescimento celular tumoral podendo fornecer dados complementares quanto a sua agressividade, prognostico, e consequentemente a sobrevida de pacientes portadores destas neoplasias. O objetivo proposto foi analisar pelo sistema SAMBA 4000, esfregacos de 17 melanomas cutaneos (primarios, metastaticos, recidiva) obtidos de material a fresco comparando-os com os obtidos apos a conservacao do mesmo material em nitrogenio liquido a -1960 C. De cada fragmento foram feitos tres esfregacos do material a fresco e tres apos descongelamento do mesmo em temperatura ambiente na presenca de solucao tampao. Todas as laminas foram fixadas e coradas pelo metodo de FEULGEN tendo como corante o reagente de SCHIFF. A leitura de 200 nucleos foi possivel em todos casos de material a fresco e 8 casos do material descongelado. O resultado foi comparado entre os dois metodos de obtencao de material em termos de medias de 15 parametros matematicos, analise estatistica monovariada e pelo teste t de STUDENT dos dados encontrados. Nao houve diferenca estatisticamente significante na area nuclear, calculo da ploidia, fracao da Fase S e no coeficiente de curtose em ambas amostras, enquanto diferencas estatisticamente significantes foram encontradas nos parametros densitometricos coeficiente de assimetria e variancia das densidades opticas e em todos os parametros de avaliacao textural da cromatina. Proposicoes para otimizacao do uso de material de melanomas cutaneos crio preservados foram sugeridas e consideracoes sobre as alteracoes celulares que ocorrem durante o processo de congelamento e descongelamento foram abordadas. A conservacao do material de melanoma cutaneo em nitrogenio liquido para uso em citometria de imagem foi possivel necessitando no entanto melhor padronizacao