Avancos na caracterizacao biologica da protease trombica Lachesis muta muta
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Data
2000
Autores
Magalhaes, Henrique Pimenta Barroso [UNIFESP]
Orientadores
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
1) Quanto ao efeito de cations mono e bivalentes na atividade amidasica da PTLmm sobre BZ-L-Arg-pNA, concluimos que a enzima em estudo e ativada significativamente pelo sodio (Na+) e inibida fortemente pelo cadmio (cd2+). 2) Quanto aos estudos cineticos da PTLmm frente a varios substratos fluorogenicos, que mimetizam o sitio de clivagem da trombina na cadeia (x e P do fibrogenio, no fator XIII, na protrombina; concluimos que a PTLmm apresentou maior especificidade pelos substratos que mimetizou a cadeia a do fibrogenio, sendo que a medida que aumentamos o tamanho do substrato, aumentou de modo direto a especificidade da enzima pelo substrato. A PTLmm nao hidrolisou o substrato de protrombina. 3) Quanto aos estudos cineticos da PTLmm frente aos substratos fluorogenicos que mimetizam o sitio de clivagem da calicreina plasmatica humana no cininogenio de alto peso molecular; concluimos que a PTLmm hidrolisou com efiCiência somente o substrato que mimetiza a sequencia carboxi-terminal do cininogenio, nao hidrolisou o substrato que mimetiza a sequencia N-terminal do cininogenio e nem o substrato maior que mimetiza a sequencia LeU373 _ lle 393 do cininogenio humano. Pelas experiencias com substratos sinteticos justificamos o fato da PTLmm nao ter atividade cinina liberadora. 4) Os diferentes substratos fluorogenicos com ligacoes Arg-X, potencialmente clivaveis pela PTLmm, nao sofreram hidrolise pela enzima, confirmando a natureza especifica da enzima pela cadeia a do fibrinogenio e pelos substratos que a mimetizam. 5) A PTLmm hidrolisou o substrato do receptor plaquetario de trombina de modo diferente da trombina, a trombina quebra somente a ligacao Arg@ser desencadeando o processo de agregacao, a PTLmm quebra in vitro a ligacao Arg@ser e outra ligacao Arg@Asn. 6) A PTLmm nao hidrolisou a cadeia P da insulina (substrato natural) que contem ligacao Arg-Gly, confirmando sua especificidade natural para quebra de ligacao Arg-Giy na cadeia a do fibrinogenio. 7) A curva de pH x atividade da PTLmm nos permitiu fixar a faixa de pH entre 8 e 9 com o pH adequado para maximizar a atividade da PTLmm sobre substratos fluorogenicos. 8) O estudo in vitro com fatores de coagulacao, nos permitiu concluir que a PTLmm tem atividade dirigida para...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2000. 264 p. ilusmapastab.