Nefrotoxicidade e morte celular (apoptose ou necrose) induzida pela cisplatina ao longo do néfron

Abstract

A nefrotoxicidade e o fator limitante do antineoplasico cisplatina. Pelo fato de que a cisplatina afeta porcoes distintas do nefron, investigamos o efeito de duas concentracoes de cisplatina (l ou lOOmM) em quatro linhagens diferentes de celulas: celulas mesangiais (CMI), celulas tubulares proximais (LLC-PKl), celulas tubulares distais (MDCK) e celulas de ducto coletor de medula interna (IMCD). O corante fluorescente para nucleos Hoechst 33342 foi empregado para quantificar as taxas de apoptose ( por cento), a eletroforese de DNA em gel de agarose, o metodo de TUNEL e a citometria de fluxo foram tambem utilizados. O metodo de exclusao utilizando acridina orange e brometo de etideo foi utilizado para avaliar a viabilidade celular ( por cento). A viabilidade das celulas CMI diminuiu com a cisplatina 100 mM apos 24 h (43,7n5,1/ 24 h; medianEPM, *p<O,O5, n=4). No entanto, a taxa de apoptose nao foi modificada, sugerindo assim necrose. Com a cisplatina lmM, as taxas de apoptose aumentaram apos 72 h (l3,8n3,4 por cento*) e a viabilidade nao mudou. Nas celulas LLC-PKL e MDCK, a apoptose aumentou com cisplatina 100 mM apos 24 horas (LLC-PKl: 82,0n5,7 por cento* e MDCK: 93,5n4,4 por cento*) e novamente, a viabilidade nao foi modificada. Com a cisplatina lmM a apoptose e a viabilidade nao foram modificadas. As celulas IMCD com cisplatina 100 mM apos 48 h tiveram a sua viabilidade diminuida (28,0n4,1 por cento*), a taxa de apoptose aumentou, mas menos que nas celulas LLC-PKL e MDCK (27,9n7,1 por cento/24h*). Com cisplatina l mM apos 72 h houve aumento da apoptose (20,0n6,7 por cento*). Apos determinar que a morte foi tipo, concentracao e tempo dependente, analisamos o mecanismo molecular envolvido nas celulas LLC-PKL e MDCK. Observamos que o inibidor da caspase-3 (z-DEVD-fmk) reduziram as taxas de apoptose em 36 por cento nas celulas LLC-PKL (l6OmM) e 91 por cento nas MDCK (l6mM). A expressao da proteina p53 foi aumentada em 12 por cento nas MDCK e diminuiu 21 por cento nas LLC-PKL tratadas com cisplatina quando analisadas pelo Western blot. O envolvimento da concentracao do calcio intracelular ([Ca 2+]i) e da peroxidacao lipidica no mecanismo de morte foram avaliadas. cisplatina nao mudou a [Ca2+]i quando analisada fluorimetricamente, assim como o bloqueador de canais de calcio, nifedipina, nao mudou as taxas de apoptose nas celulas tratadas com cisplatina. Os niveis de peroxidacao lipidica tambem nao foram modificados. Em conclusao...(au)