Extração e caracterização de possíveis intermediários da biossíntese da heparina/heparam sulfato isolados da pele de rato neonato e de células em cultura

Extração e caracterização de possíveis intermediários da biossíntese da heparina/heparam sulfato isolados da pele de rato neonato e de células em cultura

Alternative title Extration and characteristics of putative intermediates involved in the biosynthesis of heparin/heparan sulfate isolated of newborn rat skin and culture of cells
Author Castro, Ricardo Augusto Braga de Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Dietrich, Carl Peter Autor UNIFESP Google Scholar
Abstract O primeiro objetivo deste trabalho foi isolar possiveis intermediarios envolvidos na biossintese da heparina/heparam sulfato. Foram obtidos 5 compostos sintetizados pela pele de rato neonato incubada na presenca de [35S]-sulfato utilizando uma metodologia especifica para a extracao de nucleotideos acucares (Bandas Origem, A, B, C, D). Estes foram submetidos a eletroforese em papel apresentando diferentes migracoes. Esses compostos foram entao incubados com a enzima heparitinase II isolada de Flavobacterium heparinum e com as enzimas presentes no pellet de 1OOOOOxg de pele de rato neonato. Os compostos foram suceptiveis a acao de ambas as enzimas, porem os compostos incubados com as enzimas do pellet de 1OOOOOxg apresentaram produtos com migracao cromatografica semelhante a glucosamina N-sulfato, N-acetilglucosamina-6 sulfato, e glucosamina N,6- dissulfato. Esses compostos foram sintetizados na presenca de diversas drogas. A unica droga que apresentou um aumento na incorporacao de [35S]-sulfato dos diferentes compostos foi a vancomicina (antibiotico que age inibindo a sintese do peptideoglicano da parede celular de bacteria atraves da interacao com o terminal do peptideo, impedindo a transferencia do dissacarideo-pentapeptideo do lipideo para o aceptor da parede celular da bacteria). Observamos tambem que clorato de sodio apresentou uma inibicao total dos diferentes compostos sulfatados sintetizados pela pele de rato neoanto. Houve tambem uma reducao de 10 vezes da atividade especifica do heparam sulfato e de 40 vezes do dermatan sulfato quando a pele de rato neonato foi incubada na presenca de clorato de sodio por 24 horas. Uma outra etapa do trabalho foi o isolamento de uma enzima com atividade de sulfotransferase presente no sobrenadante do pellet de 1OOOOOxg. Porem ao fracionarmos as proteinas presentes no sobrenadante do pellet de 1OOOOOxg numa coluna de gel filtracao em HPLC, isolamos uma fracao que, quando incubada com PAP[35S] e nucleotideos acucares consumiu totalme ma fracao foi incubada com os nucleotideos acucares radioativos tambem houve a transferencia para o provavel lipideo aceptor. Outro modelo utilizado foi o das celulas CHO que sintetizam heparam sulfato (HS) e condroitim/dermatam sulfato (CS/DS). A mutante desta celula CHO utilizada apresenta uma inibicao de 95 por cento da sintese dos glicosaminoglicanos. Devido a essa ...(au)
Keywords Heparina/biossíntese
Heparitina Sulfato/biossíntese
Language Portuguese
Date 1999
Published in São Paulo: [s.n.], 1999. 76 p. ilus.
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 76 p.
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/16205

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