Análise do mecanismo de taquifilaxia a angiotensina II em células permanentemente transfectadas com o receptor AT1

Abstract

Uma caracteristica importante na acao da Ali e a rapida dessensibilizacao que ocorre no receptor AT1em seguida a sua ativacao repetitiva. Na investigacao dos mecanismos molecular e bioquimica pelos quais a AII leva a inibicao das respostas nas celulas estimuladas pelo peptidio, procedeu-se a transfeccao do receptor AT1 recombinante em celulas CHO. Esse receptor AT1 da AII expresso permanentemente foi caracterizado realizando-se estudos de ligacao com radioligante 3H-AII. A ligacao da 3H-AII ao receptor AT1 foi especifico (Kd: 3 nM) e saturavel (Bmax: O,41 fmol/cels.) e modulado pela proteina G. Assim, a AII estimulou a hidrolise de fosfoinositidios (EC5O: O,6 n O,1 nM) que foi completamente inibida por repetidas estimulacoes com a AII, bem como, com o seu analogo Lys2AII. A AII e a Lys2AII estimularam um aumento rapido no Ca2+ livre citosolico e influxo de 45Ca2+ apos a exposicao inicial e, rapidamente induziram a dessensibilizacao dessas respostas apos sucessivas estimulacoes. Essa taquifilaxia a AII e a Lys2AII em celulas CHO-AT1 nao era sensivel a variacoes no pH do meio, em marcante contraste a atenuacao da taquifilaxia observada em musculo liso quando o pH era elevado acima do fisiologico. Alem disso outras linhagens de celulas quando transfectadas com o mesmo CDNA, induziram taquifilaxia aos dois peptidios, diferentemente das observacoes feitas em celulas contendo receptor AT1 endogeno. Esses dados sugerem que a transferencia de DNA exogeno para o meio intracelular pode acarretar alteracoes no fenotipo e ou genotipo das celulas