Detecção da produção antígeno-específica de IFNy e IL-4 por linfócitos T de sangue periférico após infecção e vacinação
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Data
1999
Autores
Kallas, Esper Georges [UNIFESP]
Orientadores
Salomão, Reinaldo [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
A determinacao da producao antigeno-especifica de citocinas por linfocitos T apos imunizacoes e tarefa dificil devido a baixa frequencia de celulas especificas circulantes. Na intencao de detectar estas citocinas apos infeccao e vacinacao, foi analisado o perfil de producao intracelular de citocinas utilizando metodologia baseada em citometria de fluxo apos expansao dos linfocitos com antigeno e subsequente re-estimulacao com mitogenos. Celulas mononucleares de sangue periferico criopreservadas foram descongeladas e estimuladas com antigenos especificos por oito a 10 dias e subsequentemente re-estimuladas com mitogenos por cinco a seis horas. A producao de citocinas foi entao detectada por citometria de fluxo com o uso de anticorpos monoclonais especificos marcados com fluorocromos, apos fixacao com paraformaideido e permeabilizacao com saponina. Apos a expansao com antigenos e re-estimulacao com mitogenos, as celulas nao aderentes eram constituidas principalmente de linfocitos T (>92 por cento ), dos quais 98 por cento expressaram o marcador de ativacao celular CD69. A deteccao de IL-4 e IFNY concentrou-se nas celulas de memoria, que apresentavam o fenotipo CD45RO+. A producao de ambas as citocinas foi confirmada pela deteccao de RNAM atraves do ensaio de protecao de ribonucleases e microscopia de imunofluorescencia confocal. Estes metodos foram aplicados para avaliar infeccao pregressa por citomegalovirus (CMV) e herpes simples(HSV) . Foi detectada producao antigeno-especifica de IFNY e IL-4 em linfocitos de individuos soropositivos para o CMV, enquanto que somente foi detectada a producao antigeno-especifica de IFNY em linfocitos CD8- de individuos soropositivos para HSV. Para estudar a capacidade destes metodos em detectar a producao antigeno-especifica apos vacinacao, eles foram aplicados em um protocolo clinico de uma vacina experimental anti-HIV-1. Foi observado um aumento na producao antigeno-especifica de IFNY apos uma e duas doses da vacina, que corresponderam a producao de anticorpos, proliferacao linfocitaria e reacao intradermica. Portanto, estes metodos mostraram-se promissores para avaliar a producao antigeno-especifica de citocinas em situacoes clinicas
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 1999. 109 p. ilus., tab.