Caracterizacao de proteases, inibidores de proteases e uma proteina de reserva (cratilina) de sementes de Cratylia mollis
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Data
1998
Autores
Paiva, Patricia Maria Guedes [UNIFESP]
Orientadores
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Uma atividade endopeptidasica (Cm-endopepbdase), uma atividade aminopeptidasica (Cm-aminopeptidase), isoinibidores de tripsina (CmTIl e CmTI2) e uma proteina tipo vicilina (cratilina) foram isoladas e parcialmente caracterizadas de sementes de Cratylia moiiis. Cm-endopepbdase hidrolisa Bz-Arg-p-Nan e Ac-Phe-Arg-p-Nan, e termosenslvel, seu pH otimo de acao situa-se entre 7,5 e 8,0 e massa molecular estimada e 80.000. Eletroforese em gel de poliacrilamida, em presenca de DTT, revelou uma banda de massa molecular 45.000. Em cromatografia de fase reversa, em coluna de C-18, Cm-endopepddase apresentou um tempo de retencao de 24 minutos. A atividade em presenca de agentes quelantes, inibidores e reagentes grupos -SH indica que a enzima e uma serinoproteinase que pode depender de metal e talvez tenha um grupo SH importante para a sua estrutura. A hidrolise de Bz-Arg-p-Nan foi estudada em presenca de metais e foi apenas parcialmente inibida por ions de zinco. A preparacao de Cm-endopepbdase apresentou atividade proteolitica sobre caserna e hidrolisou a ligacao Phe-Ser da bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina; TPCK inibiu parcialmente a hidroiise de bradicinina. Cm-amjnopepddase hidrolisa preferencialmente Leu-b-Na e, semelhante a endopeptidase, e termosensivel, o pH otimo de acao situa-se na faixa de pH alcalino, e ocorre com massas moleculares de 80.000 e 45.000, na ausencia e na presenca de agente redutor, respectivamente. A cromatografia de fase reversa en coluna de C-18 revelou que a enzima e mais hidrofobica que Cm-endopepbdase, sendo eluida aos 30 minutos. A atividade aminopeptidasica foi parcialmente inibida por bestatina e puromicina e foi sensivel a metais, sendo totalmente abolida em presenca de zinco e parcialmente inibida com calcio, cobalto, magnesio e manganes. CmTI isolado por diferentes procedimentos, inclusive cromatografia em tripsina-Sepharose, e estavel na faixa de pH de 2,0 a 10,0 e em diferentes temperaturas. Da cromatografla de gel filtracao foi isolado o dimero do inibidor, com massa molecular 21.000. A eletroforese em gel de poliacrilamida revelou que o monomero tem massa molecular 11.000. Da cromatografia de fase reversa foram isoladas duas formas do inibidor e cujas estruturas primarias apresentaram alta homologia entre si mesmas e com inibidores da familia Bowman-Birk. Em relacao a sitios reativos, os isoinibidores diferem apenas quanto ao segundo sitio...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 1998. 151 p. ilustab.