Analise mutacional da regiao amino-terminal da subunidade beta do fator 2 de inicio de traducao (elF2)

Abstract

elF2 esta envolvido na selecao do codon AUG para inicio de traducao em eucariotos, uma vez que em levedura, mutacoes em suas tres subunidades foram identificadas por permitirem o reconhecimento de um codon UUG pelo anti-codon do Met-tRNAiMet. A subunidade beta de elF2 contem um motivo que poderia mediar interacoes com RNA compreendido por tres blocos de sete residuos de lisina, os quais sao altamente conservados evolutivamente. Neste trabalho foi realizada uma analise de delecoes nesta proteina em Saccharomyces cerevisiae, a qual indicou que somente um bloco de lislnas e suficiente para manter sua funcao in vivo, provavelmente devido a carga, uma vez que a troca destes aminoacidos por arglnina, mas nao por alanina, manteve a viabilidade celular. A remocao de qualquer um dos bloco de lisinas nao afeta a expressao de GCN4. Entre as duplas delecoes, somente aquela em que permanece o segundo bloco levou a uma marcada desrepressao de GCN4. A tripla delecao resultou em altos niveis de expressao de GCN4, correspondendo a um fenotipo dominante negativo, indicando que este alelo pode ainda estar mantendo uma funcao parcial, competindo com a proteina selvagem e proporcionando um defeito na sintese protelca. Esta proteina deletada associa-se com elF2a e elF2g e e encontrada no complexo de pre-iniciacao. A ligacao de mRNA in vitro a proteinas de fusao GST-elF2b e dependente dos blocos de lisinas, sendo mantlda na presenca de um unico bloco de lisinas ou argininas, mas nao de alaninas. A ligacao de elF2 ao mRNA e dependente da presenca dos blocos de lisinas na subunidadeb. A ligacao de elF2 a Met-tRNAiMet de forma GTP-dependente nao e afetada pela ausencia das repeticoes de lisinas. Os resultados obtidos aqui fornecem fortes evidencias do papel dos blocos de lisinas de elF2b em manter a interacao com mRNA in vivo